[發明專利]凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物測定試劑盒及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202210295923.9
• 申請日: 2022-03-23
• 公開（公告）號: CN114705870A
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發明（設計）人: 楊建;吳晗琪;黃金梅;王保升
• 申請（專利權）人: 廣州萬孚生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/86
• 分類號: G01N33/86;G01N33/573;G01N33/577;G01N33/535;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 廣州廣典知識產權代理事務所(普通合伙) 44365
• 代理人: 萬志香;顧書玲

本發明涉及一種凝血酶?抗凝血酶Ⅲ復合物抗原復合物及其制備方法以及凝血酶?抗凝血酶Ⅲ復合物測定試劑盒，所述凝血酶?抗凝血酶Ⅲ復合物由凝血酶與交聯劑Sulfo?EGS交聯后，再與抗凝血酶Ⅲ交聯而成。所述凝血酶?抗凝血酶Ⅲ復合物測定試劑盒為化學發光方法，以凝血酶?抗凝血酶Ⅲ復合物作為校對品，該試劑盒具有靈敏度高，不容易受干擾，穩定性好，特異性強的優點。本發明所述凝血酶?抗凝血酶Ⅲ復合物的檢測方法，達到了檢測樣本用量少，檢測更快速的可能，為臨床TAT定量提供了更好的選擇。

技術領域

本發明屬于醫學診斷領域，具體涉及一種凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物酶促化學發光測定試劑盒及其制備方法與應用。

背景技術

發生凝血的標志是凝血酶的形成。凝血酶能夠促使血漿中的纖維蛋白原轉變成不溶的纖維蛋白，與血栓的形成密切相關。然而人體中產生的凝血酶半衰期較短，因此直接測定凝血酶十分困難。凝血酶原被激活后，能迅速與抗凝血酶Ⅲ共價相連形成凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物(TAT)，其半衰期較長(10～30min)，因此可以通過測定TAT的濃度來反映凝血酶的濃度。

在一般病例情況下凝血酶原轉變為凝血酶，很快為抗凝血酶Ⅲ所中和，直接測凝血酶原含量不能檢測凝血酶在血中的生成。相比之下，TAT可檢測很小程度的酶原轉化。由于TAT可以作為凝血系統激活的分子標志物，能靈敏反映體內凝血情況，因此對監控機體生理病理狀態下凝血情況和血栓形成性疾病的診斷等具有重要的意義。

目前開發的TAT檢測方法較少，主要有管式化學發光方法。作為免疫分析技術中優勢明顯的化學發光免疫分析技術，在測定結果的準確性和靈敏度等方面都具有顯著優勢。目前，進口已上市相關產品只有希森美康醫用電子(上海)有限公司生產的凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物檢測試劑盒(化學發光法)，該試劑盒用于人體血漿中凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物(TAT)的定量檢測。然而，目前國內尚未有化學發光技術用于凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物檢測的成熟方法。

發明內容

本發明的目的之一是提供一種凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物，該抗原可用于制備化學發光方法的凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物測定試劑盒，使試劑盒具有靈敏度高，穩定性好，不易受干擾的特點。

一種凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物其由凝血酶與交聯劑Sulfo-EGS交聯后，再與抗凝血酶Ⅲ交聯而成，所述凝血酶與交聯劑Sulfo-EGS的用量比為5～50:1，所述凝血酶與抗凝血酶Ⅲ的用量比1:0.8～1.5。

在其中一些實施例中，所述血酶與交聯劑Sulfo-EGS的質量用量比為6～40:1，7～30:1，8～20:1，更優選為9～10：1。

在其中一些實施例中，所述凝血酶與抗凝血酶Ⅲ的用量比1：1～1.1。

本發明的另一目的是提供上述凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物的制備方法。

上述凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物的制備方法，包括以下步驟：

A.取凝血酶用PBS緩沖液進行置換原液，加入Sulfo-EGS，室溫下孵育0.8～1.5h，進行活化，得混合液；

B.取抗凝血酶Ⅲ10mg用PBS緩沖液進行置換原液后，立即全部加入上述混合液中，室溫下孵育1h～1.5h，進行交聯；

C.交聯完成后，脫鹽純化，混勻，得到凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物的溶液。

在其中一些實施例中，步驟A中，所述孵育1h～1.5h，優選為1h。

在其中一些實施例中，步驟B中，所述孵育1h～1.2h，優選為1h。

本發明的另一目的是提供一種凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物測定試劑盒。

凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物測定試劑盒，包括上述凝血酶-抗凝血酶Ⅲ復合物作為校準品。

在其中一些實施例中，還包括以下至少一種：