[發明專利]具有降糖降脂功效的植物乳桿菌84-3特異性分子靶標及其檢測方法

有效

• 申請號: 202210293019.4
• 申請日: 2022-03-23
• 公開（公告）號: CN114540521B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 吳清平;梁婷婷;李瀅;謝新強;吳磊;張菊梅;王涓;丁郁;陳謀通;薛亮;葉青華;吳詩;古其會;陳惠元;吳軍林
• 申請（專利權）人: 廣東省科學院微生物研究所（廣東省微生物分析檢測中心）;廣東環凱生物科技有限公司;廣東科環生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 劉明星;朱聰聰

1.用于檢測植物乳桿菌或植物乳桿菌84-3的特異性分子靶標，其特征在于，所述的用于檢測植物乳桿菌的特異性分子靶標是如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列，所述的用于植物乳桿菌84-3的特異性分子靶標是如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

2.權利要求1所述的特異性分子靶標在檢測植物乳桿菌種和/或植物乳桿菌84-3中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，權利要求1所述的特異性分子靶標在檢測含有植物乳桿菌和/或植物乳桿菌84-3的功能食品及乳酸菌制品中的應用。

4.一種檢測植物乳桿菌和/或植物乳桿菌84-3的引物組，其特征在于，所述的檢測植物乳桿菌的引物為：正向引物145F：5'-ACGCCCAACTTTCCGTTGTA-3'和反向引物145R：5'-CGACCGCACTATGGATGTGT-3'；所述的檢測植物乳桿菌84-3的引物為：正向引物175F：5'-AGAGTTACGGCAGTTCAAAACA-3'，反向引物175R：5'-ATCATCGTCGCCATCTCCT-3'。

5.一種檢測植物乳桿菌和/或植物乳桿菌84-3的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)提取待檢測微生物的DNA，以提取的DNA為模板，分別采用權利要求4所述的檢測植物乳桿菌種和/或植物乳桿菌84-3的引物組對其進行PCR擴增；

(2)將擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析，電泳結果出現大小145bp和175bp的條帶則判定樣品中分別含有植物乳桿菌和植物乳桿菌84-3，若電泳結果未出現目標大小的條帶則判定樣品中不含有植物乳桿菌和植物乳桿菌84-3。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增，其反應體系為25μl，其中包括：2×Taq PCR MasterMixⅡ12.5μl、正向引物和反向引物各1μl、DNA模板1μl和無菌雙蒸水9.5μl。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，當檢測植物乳桿菌時，其PCR反應條件為：95℃預變性3min；95℃變性30s，68.5℃退火30s，72℃延伸30s，共30-35個循環；最后72℃延伸10min。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，當檢測植物乳桿菌84-3時，其PCR反應條件為：95℃預變性3min；95℃變性30s，68℃退火30s，72℃延伸30s，共30-35個循環；最后72℃延伸10min。

9.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述的PCR擴增是實時熒光定量PCR擴增，反應體系為20μl，其中包括：2×RealUniversal PreMix預混液10μl,50×ROX ReferenceDye0.4μl，正向引物和反向引物各0.6μl、DNA模板1μl和無菌雙蒸水7.4μl。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，實時熒光定量PCR反應條件為：95℃預變性3min；95℃變性5s，60.0℃退火30s，72℃延伸10s，2-4步共40個循環；最后72℃延伸10min。