[發明專利]一種總同型半胱氨酸的電化學免疫檢測方法

在審

• 申請號: 202210275824.4
• 申請日: 2022-03-21
• 公開（公告）號: CN114577875A
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 賈冬玲;張宜凡;趙芳;劉敏敏
• 申請（專利權）人: 上海健康醫學院
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327;G01N33/68
• 代理公司: 杭州知閑專利代理事務所(特殊普通合伙) 33315
• 代理人: 朱朦琪

1.一種總同型半胱氨酸的電化學免疫檢測方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟一、SAH電化學免疫傳感器的制備：

(1)將納米復合材料與水混合得到懸浮液A，將粘結劑與水混合得到溶液B，將鏈霉親和素與水混合得到溶液C，將懸浮液A、溶液B與溶液C混合后滴涂于電極表面，得到修飾后的電極；

所述納米復合材料選自Au-NPs/RGO/SiO₂納米復合材料、Au-NPs/SiO₂納米復合材料或Au-NPs/RGO納米復合材料；

所述粘結劑選自殼聚糖；

(2)在所述修飾后的電極表面滴涂生物素化的SAH抗體，溫育下反應后，用磷酸鹽緩沖溶液沖洗；再將牛血清蛋白溶液滴涂于經上述處理后的修飾后的電極，室溫下封閉后，用磷酸鹽緩沖溶液沖洗，得到SAH電化學免疫傳感器；

步驟二、繪制工作曲線：

將所述SAH電化學免疫傳感器在不同濃度下的SAH抗原溶液中溫育，然后用磷酸鹽緩沖溶液沖洗，得到孵育SAH抗原的電化學免疫傳感器；以所述孵育SAH抗原的電化學免疫傳感器為工作電極，飽和甘汞電極或Ag/AgCl電極作為輔助電極，鉑片電極作為對電極，在鐵氰化鉀測試液中，用差示脈沖伏安法檢測電化學信號，得出不同濃度SAH與電流信號響應的工作曲線；

步驟三、總同型半胱氨酸的檢測：

(3)將待測樣本與含有二硫鍵還原劑的樣品處理液進行反應，再用SAH水解酶溶液與過量腺苷將待測樣本中的Hcy轉化成SAH，得到處理后的樣本溶液；

(4)將所述SAH電化學免疫傳感器在所述處理后的樣本溶液中溫育，然后用磷酸鹽緩沖液沖洗，以此為工作電極，在鐵氰化鉀測試液中檢測電流響應，根據步驟二獲得的工作曲線，得到待測樣本中SAH的含量，進一步計算獲得待測樣本中總同型半胱氨酸的含量。

2.根據權利要求1所述的總同型半胱氨酸的電化學免疫檢測方法，其特征在于，步驟一中，所述納米復合材料的制備，具體包括：

A)將SiO₂納米球分散在水中得到SiO₂分散液，與含有正電荷的聚合物水溶液混合，經自組裝得到帶正電荷的SiO₂納米復合材料；

含有正電荷的聚合物選自聚二烯丙基二甲基氯化銨、聚乙烯吡啶、聚乙烯亞胺中的一種或多種；

B)將石墨烯分散在水中得到石墨烯分散液，將所述帶正電荷的SiO₂納米復合材料分散在水中得到分散液Ⅰ，將兩者混合，經自組裝得到RGO/SiO₂復合材料；

C)將所述RGO/SiO₂復合材料分散在乙醇中，加入硅烷偶聯劑進行改性處理，得到氨基功能化的RGO/SiO₂納米復合材料；

所述硅烷偶聯劑選自3-氨丙基乙氧基硅烷和/或3-氨丙基甲氧基硅烷；

D)將所述氨基功能化的RGO/SiO₂納米復合材料分散在水中得到分散液Ⅱ，將膠體金水溶液與所述分散液Ⅱ混合，經自組裝得到Au-NPs/RGO/SiO₂納米復合材料；

當所述納米復合材料選自Au-NPs/RGO/SiO₂納米復合材料，制備步驟包括上述A)～D)；

當所述納米復合材料選自Au-NPs/SiO₂納米復合材料，制備步驟僅包括上述A)和D)；

當所述納米復合材料選自Au-NPs/RGO納米復合材料制備步驟僅包括上述C)和D)。