[發明專利]一種用于線粒體置換技術的改良顯微操作液及其制備方法

在審

• 申請號: 202210261035.5
• 申請日: 2022-03-15
• 公開（公告）號: CN114807239A
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 李穎;紀亞忠
• 申請（專利權）人: 上海市同濟醫院
• 主分類號: C12N15/89
• 分類號: C12N15/89
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 竺路玲

本發明提供了一種用于線粒體置換技術的改良顯微操作液及其制備方法。該用于線粒體置換技術的改良顯微操作液由細胞松弛素B、二甲亞砜和Vitrolife輔助生殖IVF?配子處理液配制而成；在該改良顯微操作液中，細胞松弛素B的濃度為＞0μg/mL且＜2.5μg/mL。本發明提供的用于線粒體置換技術的改良顯微操作液僅通過調整細胞松弛素B的濃度便達到了提高線粒體置換技術的有效性和安全性的目的，操作簡單，為徹底阻斷線粒體疾病母胎間遺傳提供了安全保障。

技術領域

本發明涉及輔助生殖技術領域，具體涉及一種用于線粒體置換技術的改良顯微操作液及其制備方法。

背景技術

卵子中的線粒體DNA(mitochondrial DNA，mtDNA)突變引起母系家族性疾病，即遺傳性線粒體疾病，目前尚無有效治療手段。

線粒體置換技術是用健康捐贈者的卵子的卵胞質來替換線粒體遺傳病患者含致病mtDNA的卵胞質的一項技術，為這類患者帶來了誕生健康后代的福音，有望徹底阻斷線粒體疾病母胎間遺傳，但其有效性和安全性一直是國內外專家爭論的焦點，也是阻礙其臨床廣泛應用的關鍵。目前該技術常規使用的顯微操作液中含有濃度為5μg/mL的細胞松弛素B(cytochalasin B，CB)來維持生殖細胞質的穩定性，從而保障線粒體置換操作的順利進行。然而CB是一種真菌分泌的細胞滲透性毒素，具有抑制肌動蛋白聚合，從而破壞細胞骨架的作用。在小鼠和人卵母細胞的顯微操作中普遍能觀察到一種現象：含濃度為5μg/mL的CB的顯微操作液會引起卵母細胞中線粒體朝細胞核聚集或形成團簇狀。我們不禁要問，這種非生理現象是否會對線粒體置換技術的有效性和重構胚胎的安全性造成影響呢？細胞核周圍的線粒體聚集是否會在核供體取出過程中帶入更多的含致病基因的線粒體呢？迄今為止，尚未有研究能確切回答這些問題。由于線粒體遺傳疾病的嚴重程度取決于突變和正常mtDNA的比率，即卵子/胚胎線粒體的異質性，這促使科學家們嘗試各種方法使患者卵胞漿內的線粒體異質性盡可能降至最低，包括線粒體自噬、極體移植、基因編輯、提高顯微操作機械技術等，但這些方法均昂貴且實施難度高，目前尚未有研究從改良顯微操作液中CB的濃度這一簡單易行的方法入手，來突破線粒體置換技術有效性和安全性的研究瓶頸。

發明內容

為了克服現有技術中的缺陷，本發明提供了一種用于線粒體置換技術的改良顯微操作液及其制備方法，來提高線粒體置換技術的有效性和安全性。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明的第一方面是提供一種用于線粒體置換技術的改良顯微操作液，由細胞松弛素B、二甲亞砜和Vitrolife輔助生殖IVF-配子處理液配制而成；在該改良顯微操作液中，細胞松弛素B的濃度為＞0μg/mL且＜2.5μg/mL。

進一步地，在該改良顯微操作液中，細胞松弛素B的濃度為＞0μg/mL且≤1μg/mL。

進一步地，在該改良顯微操作液中，細胞松弛素B的濃度為1μg/mL。

本發明的第二方面提供上述改良顯微操作液的制備方法，包括如下步驟：

步驟一，將細胞松弛素B干粉溶解于二甲亞砜中混勻，配成細胞松弛素B 母液；

步驟二，將細胞松弛素B母液加入Vitrolife輔助生殖IVF-配子處理液中使得細胞松弛素B的濃度為＞0μg/mL且＜2.5μg/mL；優選為＞0μg/mL且≤1μg/mL，更優選為1μg/mL。

進一步地，步驟一中的細胞松弛素B母液的濃度為5～15mg/mL。

進一步地，步驟一中的細胞松弛素B母液的濃度為10mg/mL。

本發明的第三方面是提供一種用于線粒體置換療法的試劑盒，該試劑盒包括上述改良顯微操作液。

本發明采用以上技術方案，與現有技術相比，具有如下技術效果：