[發明專利]一種苯醚甲環唑半抗原、人工抗原、抗體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202210248415.5
• 申請日: 2022-03-14
• 公開（公告）號: CN114621175B
• 公開（公告）日: 2023-06-27
• 發明（設計）人: 雷紅濤;潘康亮;沈興;李向梅;韋曉群;徐小艷
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C07D317/22
• 分類號: C07D317/22;C07C69/40;C07C67/08;C07K14/765;C07K14/77;C07K1/107;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/577
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 段卉

本發明提供了一種苯醚甲環唑半抗原、人工抗原、抗體及其制備方法和應用，本發明制備得到了兩種半抗原，半抗原B?PH和半抗原B?SG，應用半抗原B?PH偶聯載體蛋白BSA得到人工抗原B?PH?BSA，并進一步制備得到用于檢測苯醚甲環唑的特異性抗體，以人工抗原B?SG?OVA作為包被原；該抗體對苯醚甲環唑具有良好的靈敏度和特異性，半抑制濃度為1.75ng/mL，最低檢測限為0.022ng/mL，定量檢測范圍為0.11～27.57ng/mL，對苯醚甲環唑類似物無交叉反應，可特異性檢測苯醚甲環唑；本發明提供了更優的苯醚甲環唑的免疫檢測原料，為苯醚甲環唑的快速準確檢測提供了更優選擇。

技術領域

本發明涉及食品檢測技術領域，具體涉及一種苯醚甲環唑半抗原、人工抗原、抗體及其制備方法和應用。

背景技術

苯醚甲環唑(difenoconazole)是一種毒性低，化學性質穩定，持效期長的廣譜三唑類殺菌劑，屬于14α-甾醇脫甲基化抑制劑，可以干擾菌絲生長，抑制病原體孢子萌發，最終抑制真菌生長。其廣泛用于防治水稻、葡萄、梨、香蕉、甜菜等多種作物上的葉枯病、炭疽病、葉斑病、白粉病、黑星病等病害。但大量施用苯醚甲環唑會造成農藥殘留，殘留的苯醚甲環唑會進入生態系統，對生態環境、動物和人類健康產生不利影響。按照我國農藥的毒性分級標準，苯醚甲環唑的毒性經口大于500mg/kg，對人的每日容許攝入量為0.01mg/kg體重。

苯醚甲環唑常規檢測方法主要有氣相色譜法、高效液相色譜-串聯質譜法等儀器方法，然而，這些方法雖然具有檢測效率高、準確度高、抗干擾能力強等特點；但是，檢測所需的儀器設備昂貴、成本高、樣品前處理繁雜、需專業人士操作，不符合大批量樣品現場檢測要求。

基于抗原-抗體特異性分子識別的免疫檢測方法，在現場檢測方面具有更大優勢，表現出快速、靈敏、簡便等特點，并且成本低廉，對操作人員技能要求較低。現有技術公開了一些用于苯醚甲環唑檢測的半抗原、抗原、抗體等，但是存在著苯醚甲環唑半抗原合成步驟多、反應副產物多、抗體檢測限相對較高等問題(馮久慧.苯醚甲環唑免疫檢測方法的研究[D].天津科技大學,2016.)。

免疫分析方法的關鍵在于設計出合適的半抗原，從而制備出靈敏度高、特異性強的抗體，因此，有必要研究出全新的苯醚甲環唑半抗原，簡化了半抗原的合成步驟，降低抗體的檢測限，提高苯醚甲環唑抗體的特異性。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術中苯醚甲環唑免疫檢測半抗原、抗體存在的缺陷和不足，提供一種苯醚甲環唑半抗原、人工抗原、抗體及其制備方法和應用。

本發明的目的在于提供苯醚甲環唑半抗原。

本發明的目的還在于提供所述苯醚甲環唑半抗原在制備苯醚甲環唑人工抗原中的應用。

本發明的目的還在于提供苯醚甲環唑人工抗原。

本發明的目的還在于提供所述苯醚甲環唑人工抗原在制備苯醚甲環唑抗體中的應用。

本發明的目的還在于提供一種苯醚甲環唑多克隆抗體。

本發明的目的還在于提供一種苯醚甲環唑的檢測方法。

本發明的目的還在于提供一種檢測苯醚甲環唑的試劑盒。

本發明上述目的通過以下技術方案實現：

本發明提供了一種苯醚甲環唑半抗原，為半抗原B-PH或半抗原B-SG，所述半抗原B-PH的結構式如式(I)所示，

所述半抗原B-PH采用系統命名法命名為：4-((2-(2-氯-4-(4-氯苯氧基)苯基)-4-甲基-1,3-二氧戊環-2-基)甲氧基)苯甲酸，即4-((2-(2-chloro-4-(4-chlorophenoxy)phenyl)-4-methyl-1,3-dioxolan-2-yl)methoxy)benzoic?acid；