[發(fā)明專利]堿性磷酸酶標記抗體試劑

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210246515.4
• 申請日: 2022-03-14
• 公開（公告）號: CN114755410A
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周倩;毛善檢;李宗祥;羅繼全;徐明;戴斌
• 申請（專利權(quán)）人: 三諾生物傳感股份有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;C07K16/00
• 代理公司: 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發(fā)明涉及生化檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及堿性磷酸酶標記抗體試劑。本發(fā)明提供了堿性磷酸酶標記抗體試劑，該試劑中保存液，能夠提高組分的穩(wěn)定性，特別是提高堿性磷酸酶標記抗體的穩(wěn)定性，從而使該試劑用于待測樣本的檢測具備更好的穩(wěn)定性、靈敏度、準確性、特異性和精密度。并且，本發(fā)明中，所述堿性磷酸酶標記抗體的制備在活化階段無需封閉劑，以2?IT活化堿性磷酸酶，以Sulfo?SMCC活化抗體，避免了活化劑對ALP構(gòu)象的干擾，獲得的酶標記抗體具有良好的穩(wěn)定性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生化檢測技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及堿性磷酸酶標記抗體試劑。

背景技術(shù)

堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP或AKP)是目前免疫診斷試劑產(chǎn)品最常用的標記酶之一。以堿性磷酸酶(ALP)標記抗體后，經(jīng)過免疫反應(yīng)形成固相包被抗體-待測抗原-酶標記抗體復(fù)合物，該復(fù)合物中的堿性磷酸酶使發(fā)光劑脫去磷酸根基團而發(fā)光。

堿性磷酸酶標記抗體試劑即含有堿性磷酸酶標記抗體和緩沖液的試劑，該試劑對免疫檢測的結(jié)果存在重要的影響。研究表明，該試劑對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響的原因主要包括堿性磷酸酶標記抗體的制備方法和緩沖液的組分有關(guān)。第一方面，目前常用的堿性磷酸酶標記抗體的方法包括，EDC-NHS以及SMCC標記方法。EDC-NHS標記方法的標記時間長、偶聯(lián)物穩(wěn)定性較差。SMCC標記方法中，常用的是用2-MEA、TCEP活化抗體，Sulfo-SMCC活化堿性磷酸酶。2-MEA和TCEP活化抗體，破壞了抗體結(jié)構(gòu)，對穩(wěn)定性有一定的影響，且活化環(huán)境比較嚴格，活化時間長。第二方面，保存液對堿性磷酸酶酶標記抗體的穩(wěn)定性有著重大的作用。但目前常用的保存液中，大多含有葡萄糖、甘油、聚乙二醇聚合物等類似的保護劑，添加種類多，試劑組分復(fù)雜，保護效果并不明顯；并且，添加這些保護劑后，可能影響試劑性能。

目前，關(guān)于如何進一步提高堿性磷酸酶標記抗體試劑的穩(wěn)定性，進而提高檢測的效果，仍有待進一步研究。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供穩(wěn)定性良好的堿性磷酸酶標記抗體試劑。

本發(fā)明提供了一種堿性磷酸酶標記抗體的試劑，其包括堿性磷酸酶標記抗體母液和保存液。

本發(fā)明中，所述保存液由水和10～100mmol/L緩沖鹽、2～20g/L蛋白質(zhì)、0.5～5g/L表面活性劑、0.1～0.5mol/L鹽、0.5～5g/L防腐劑、0.5～20g/L保護劑組成；其中，所述保護劑為甘氨酸和硫酸鹽。

本發(fā)明所述的保護劑與酶標記抗體母液可以混合存在也可以相互獨立存在，本發(fā)明對此不做限定。本發(fā)明所述保存液可以以工作濃度同等濃度存在，也可為工作濃度的2～100倍濃度存在。本發(fā)明所述試劑的保存液中不含不添加多元醇或生化試劑而使用甘氨酸和硫酸鹽，甘氨酸與硫酸鹽與其他各組分共同作用，顯著提高ALP標記抗體的穩(wěn)定性。其中，所述硫酸鹽為硫酸鈉或硫酸鉀。

本發(fā)明用常見的硫酸鈉鹽和甘氨酸作為保護劑，有效提高堿性磷酸酶標記心肌肌鈣蛋白I抗體在儲存和使用的穩(wěn)定性。組分簡單，容易配制，成本低廉。

在本發(fā)明所述的ALP標記抗體試劑中，其中本發(fā)明所述制備方法制得的堿性磷酸酶標記抗體的濃度為0.5～5ng/mL。本發(fā)明一些實施例中，本發(fā)明提供的堿性磷酸酶標記抗體的試劑，由水和0.5～5ng/mL堿性磷酸酶標記抗體、10～100mmol/L緩沖鹽、2～20g/L蛋白質(zhì)、0.5～5g/L表面活性劑、0.1～0.5mol/L鹽、0.5～5g/L防腐劑、0.5～20g/L保護劑組成；所述保護劑為甘氨酸和硫酸鹽。實驗表明，在如上試劑的選擇下，所得保存液的效果優(yōu)于其他組分的選擇或濃度。其中，所述硫酸鹽為硫酸鈉或硫酸鉀。

本發(fā)明所述試劑中，所述緩沖鹽選自Tris、MES、MOPS、HEPES中任意一種；本發(fā)明實施例中，所述緩沖鹽為Tris，所述緩沖鹽濃度為50mM。