[發(fā)明專利]一種蔗糖磷酸化酶突變體、編碼基因及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210230270.6
• 申請日: 2022-03-10
• 公開（公告）號: CN114703158A
• 公開（公告）日: 2022-07-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳小龍;周瑤瑤;朱林江;陸躍樂;甘恬;范永仙
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江工業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12N9/10
• 分類號: C12N9/10;C12N15/54;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/60;C12P19/18;C12R1/19
• 代理公司: 浙江千克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 冷紅梅

1.一種蔗糖磷酸化酶突變體，由氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蔗糖磷酸化酶（BbrSPase）經(jīng)單點(diǎn)突變或多點(diǎn)突變獲得，所述單點(diǎn)突變或多點(diǎn)突變的突變位點(diǎn)為下列之一或其中兩種以上：（1）第134位脯氨酸，（2）第341位亮氨酸，（3）第343位亮氨酸。

2.如權(quán)利要求1所述蔗糖磷酸化酶突變體，其特征在于所述點(diǎn)突變?yōu)橄铝兄换蚱渲袃煞N以上：（1）第134位脯氨酸突變?yōu)榘腚装彼幔?）第341位亮氨酸突變?yōu)楫惲涟彼峄蚶i氨酸，（3）第343位亮氨酸突變?yōu)楫惲涟彼帷?/p>

3.如權(quán)利要求1所述蔗糖磷酸化酶突變體，其特征在于所述蔗糖磷酸化酶突變體為下列之一：

（1）氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第134位脯氨酸突變?yōu)榘腚装彼幔?/p>

（2）氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位亮氨酸突變?yōu)楫惲涟彼幔?/p>

（3）氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位的亮氨酸突變?yōu)槔i氨酸；

（4）氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第343位的亮氨酸突變?yōu)楫惲涟彼幔?/p>

（5）氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位的亮氨酸突變?yōu)楫惲涟彼幔?43位的亮氨酸突變?yōu)楫惲涟彼幔?/p>

（6）氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位的亮氨酸突變?yōu)楫惲涟彼幔?43位的亮氨酸突變?yōu)楦彼幔?/p>

（7）氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位的亮氨酸突變?yōu)槔i氨酸，第343位的亮氨酸突變?yōu)楦彼幔?/p>

（8）氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示蔗糖磷酸化酶第341位的亮氨酸突變?yōu)楫惲涟彼幔?43位的亮氨酸突變?yōu)樘於０贰?/p>

4.權(quán)利要求1所述蔗糖磷酸化酶突變體的編碼基因。

5.如權(quán)利要求2所述的編碼基因，其特征在于所述編碼基因核苷酸序列如SEQ ID No.3~10之一所示。

6.含有權(quán)利要求4所述編碼基因的重組表達(dá)載體。

7.含有權(quán)利要求4所述編碼基因的工程菌。

8.權(quán)利要求1所述蔗糖磷酸化酶突變體在酶法制備L-抗壞血酸葡萄糖苷中的應(yīng)用。

9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述L-抗壞血酸葡萄糖苷為L-抗壞血酸-2-葡萄苷。

10.如權(quán)利要求8或9所述的應(yīng)用，其特征在于所述應(yīng)用為：以L-抗壞血酸和蔗糖為底物，加入所述蔗糖磷酸化酶突變體或其重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化至宿主微生物中獲得基因工程菌菌體細(xì)胞，在20～60℃條件下，于pH 4.0～6.5的催化體系中反應(yīng)，得到含有L-抗壞血酸葡萄糖苷的催化液。