[發(fā)明專利]一種用于細(xì)胞定量分析的熒光補(bǔ)償方法及其系統(tǒng)

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210229292.0
• 申請(qǐng)日: 2022-03-09
• 公開（公告）號(hào): CN114755164A
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 強(qiáng)茂;紀(jì)存朋;林文革;謝萬(wàn)龍;孫謐
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島瑞斯凱爾生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N15/14
• 分類號(hào): G01N15/14
• 代理公司: 武漢聚信匯智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 42258
• 代理人: 徐松

本發(fā)明提供了一種用于細(xì)胞定量分析的熒光補(bǔ)償方法及其系統(tǒng)，屬于流式數(shù)據(jù)分析技術(shù)領(lǐng)域，該一種用于細(xì)胞定量分析的熒光補(bǔ)償方法包括：獲得各測(cè)量通道的熒光信號(hào)強(qiáng)度數(shù)據(jù)并繪制信號(hào)強(qiáng)度波形；對(duì)所述信號(hào)強(qiáng)度波形進(jìn)行濾波處理提取有效的峰值；根據(jù)所述有效的峰值計(jì)算得出所述測(cè)量通道的信號(hào)值；逐個(gè)計(jì)算各種熒光素在各所述測(cè)量通道的串?dāng)_系數(shù)，經(jīng)過(guò)計(jì)算后得出一個(gè)熒光補(bǔ)償矩陣；通過(guò)測(cè)量并計(jì)算每種熒光素在所有測(cè)量通道的比例，并可得到一個(gè)熒光補(bǔ)償矩陣，不僅能夠使得各種熒光素真實(shí)的熒光信號(hào)強(qiáng)度值計(jì)算簡(jiǎn)便，而且還能夠使得各種熒光素真實(shí)的熒光信號(hào)強(qiáng)度值的誤差更小，更接近準(zhǔn)確值。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于流式數(shù)據(jù)分析技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及一種用于細(xì) 胞定量分析的熒光補(bǔ)償方法及其系統(tǒng)。

背景技術(shù)

流式細(xì)胞儀是一種集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測(cè)量技術(shù)、 電子計(jì)算機(jī)技術(shù)、細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)和單克隆抗體技術(shù)為一體的新型 高科技儀器。對(duì)懸液中處于高速、直線流動(dòng)的單細(xì)胞或其他顆粒，通 過(guò)檢測(cè)散射光信號(hào)和(或)標(biāo)記的熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)高速逐一的多參數(shù)定 量分析。在細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞周期動(dòng)力學(xué)、免疫學(xué)、血液學(xué)及腫瘤學(xué) 等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。

在進(jìn)行流式細(xì)胞分析的時(shí)候，待測(cè)樣本通常攜帶兩種或兩種以上 的熒光素，如藻紅蛋白(PE)、異硫氰熒光素(FITC)、葉絲素蛋白(PerCP) 等。熒光素經(jīng)過(guò)激光激發(fā)以后發(fā)射出不同波長(zhǎng)的熒光。理論上來(lái)講， 通過(guò)選擇合適的分光組件可以將不同的熒光分開，使得每個(gè)探測(cè)器只 接收一種熒光信號(hào)，而不會(huì)檢測(cè)到其他的熒光信號(hào)。然而實(shí)際上，目 前常用的熒光染料的激發(fā)波長(zhǎng)或發(fā)射波長(zhǎng)都是正態(tài)或者偏態(tài)分布，有 很寬的范圍，因此盡管他們的發(fā)射峰值各不一樣，但是發(fā)射譜常有重 疊。

然而，現(xiàn)有的部分流式細(xì)胞儀采用手動(dòng)補(bǔ)償?shù)姆椒▉?lái)實(shí)現(xiàn)，手動(dòng) 補(bǔ)償對(duì)于兩色和三色分析可以很好地完成補(bǔ)償功能，但是對(duì)于四色及 四色以上的分析操作難度太大而導(dǎo)致幾乎不可能實(shí)現(xiàn)，因此，逐漸采 取了自動(dòng)補(bǔ)償?shù)姆椒▉?lái)實(shí)現(xiàn)。但是在自動(dòng)補(bǔ)償中，對(duì)于樣品檢測(cè)數(shù)量 大，涉及熒光色數(shù)量多，樣品檢測(cè)次數(shù)多，進(jìn)而使計(jì)算增加了難度， 并且，由于不斷的使用造成誤差也越來(lái)越大，導(dǎo)致無(wú)法達(dá)到預(yù)期的補(bǔ) 償效果。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明實(shí)施例提供了一種用于細(xì)胞定量分析的熒光補(bǔ)償方法及 其系統(tǒng)，其目的在于解決現(xiàn)有的流式細(xì)胞儀自動(dòng)補(bǔ)償中無(wú)法保證各種 熒光素真實(shí)的熒光信號(hào)強(qiáng)度值的準(zhǔn)確性的問題。

鑒于上述問題，本發(fā)明提出的技術(shù)方案是：

第一方面，本發(fā)明實(shí)施例提供一種用于細(xì)胞定量分析的熒光補(bǔ)償 方法，包括：

獲得各測(cè)量通道的熒光信號(hào)強(qiáng)度數(shù)據(jù)并繪制信號(hào)強(qiáng)度波形；

對(duì)所述信號(hào)強(qiáng)度波形進(jìn)行濾波處理提取有效的峰值；

根據(jù)所述有效的峰值計(jì)算得出各所述測(cè)量通道的信號(hào)值；

逐個(gè)計(jì)算各種熒光素在各所述測(cè)量通道的串?dāng)_系數(shù)，經(jīng)過(guò)計(jì)算后 得出一個(gè)熒光補(bǔ)償矩陣；其中，具體包括：

獲得各種所述熒光素在所有所述測(cè)量通道的信號(hào)值；

逐個(gè)計(jì)算所述熒光素在其他所述測(cè)量通道的信號(hào)值與最高所述 測(cè)量通道的信號(hào)值之間的比值得到所述串?dāng)_系數(shù)；

根據(jù)每個(gè)所述熒光素的所述串?dāng)_系數(shù)得到一個(gè)所述熒光補(bǔ)償矩 陣；

將每個(gè)所述測(cè)量通道的信號(hào)值輸入所述熒光補(bǔ)償矩陣中得到各 種熒光素真實(shí)的熒光信號(hào)強(qiáng)度值。

作為本發(fā)明的一種優(yōu)選技術(shù)方案，所述獲得測(cè)量通道的熒光信號(hào) 強(qiáng)度數(shù)據(jù)得到信號(hào)強(qiáng)度波形，具體包括：

在特定時(shí)間段內(nèi)向所述下位機(jī)采集各所述測(cè)量通道的熒光信號(hào) 強(qiáng)度數(shù)據(jù)；

根據(jù)各所述測(cè)量通道的熒光信號(hào)強(qiáng)度數(shù)據(jù)繪制信號(hào)強(qiáng)度波形。