[發明專利]一種梅花離體再生的方法

在審

• 申請號: 202210224871.6
• 申請日: 2022-03-09
• 公開（公告）號: CN114431151A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 張俊衛;陳曼曼;鄭亞霞;張杰;包滿珠
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 覃蛟

本發明公開了一種梅花離體再生的方法，涉及植物組織培養技術領域。具體而言，該方法包括對再生的梅花不定芽進行伸長培養，伸長培養包括依次進行的第一階段伸長培養、第二階段伸長培養、第三階段伸長培養和第四階段伸長培養。該方法促進了梅花再生芽的伸長生長，可以有效抑制繼代過程中頂芽褐化枯死及葉片黃化等現象的發生。

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體而言，涉及一種梅花離體再生的方法。

背景技術

梅花(Prunus mume)，薔薇科李屬植物，原產中國，是中國十大傳統名花之一，極具觀賞價值。梅花遺傳轉化體系的建立是研究梅花基因功能、創新梅花種質資源等的基礎，而建立高效穩定的植物再生體系是進行遺傳轉化的基礎。目前已有從梅花葉片(呂英民等，2006)、胚軸(聞娟，2009)、成熟胚子葉(張俊衛等，2014，2019；曹珊珊，2015；楊佩娟，2016)等材料誘導再生芽的報道，但梅花再生芽在繼代過程中會出現伸長生長慢，不定芽伸長數量少，以及頂芽褐化枯死及葉片失綠黃化等問題，是限制再生芽成苗生根的重要因素。

鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明的目的在于提供一種梅花離體再生的方法，該方法促進了梅花再生芽的伸長生長，可以有效抑制繼代過程中頂芽褐化枯死及葉片黃化等現象的發生。

本發明是這樣實現的：

本發明提供了一種梅花離體再生的方法，其包括：對再生的梅花不定芽進行伸長培養，伸長培養包括依次進行的第一階段伸長培養、第二階段伸長培養、第三階段伸長培養和第四階段伸長培養；

第一階段伸長培養采用第一培養基進行培養：第一培養基包括：在QL基本培養基中附加1-1.2mg/L的6-芐氨基嘌呤和0.1-0.12mg/L的吲哚丁酸；

第二階段伸長培養采用第二培養基進行培養：第二培養基包括：在QL基本培養基中附加0.7-0.9mg/L的6-芐氨基嘌呤和0.05-0.07mg/L的吲哚丁酸；

第三階段伸長培養采用第三培養基進行培養：第三培養基包括：在QL基本培養基中附加0.7-0.8mg/L的6-芐氨基嘌呤和0.06-0.07mg/L的吲哚丁酸；

第四階段伸長培養采用第四培養基進行培養：第四培養基包括：在QL基本培養基中附加0.6-0.7mg/L的6-芐氨基嘌呤和0.04-0.05mg/L的吲哚丁酸。

發明人創造性的提出了一種梅花離體再生的方法，該方法能有效抑制再生芽的褐化，維持頂芽正常伸長生長，減少黃化葉片數量，為后續繼代及生根培養提供優質的外植體材料，有利于提高存活率，進而保證了實驗的順利進行。

發現通過四階段的伸長培養，再生芽的伸長率較高、易于成苗，且生長勢良好，頂芽與葉片黃化枯死的現象減少。

第一階段伸長培養至第四階段伸長培養的培養基均不相同，若反復使用同一種激素組合(即相同的伸長培養基)進行伸長培養，會導致伸長芽的生長勢越來越弱，大部分再生芽主莖出現頂芽黃化及褐化枯死現象，后期培養過程中成苗難度大，非常不利于材料的生長及保存。

第一階段伸長培養的第一培養基中各激素的組合比較重要，不同激素組合的伸長效果有明顯差異。發明人發現，若培養基的組成不在本發明提供的第一培養基的范圍內，則會導致再生芽接種至伸長培養基中出現伸長芽數量較少、生長較為緩慢、主莖較細弱或較粗、叢生芽增殖較多但生長緩慢、無或極少有再生芽伸長生長等現象。而在本發明提供的第一培養基激素組合下進行培養，不定芽伸長快，主莖細。