[發(fā)明專利]一種磁珠法病毒核酸提取試劑盒以及使用方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210215819.4
• 申請日: 2022-03-07
• 公開（公告）號: CN114438076A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 傅明華;李美瓊;夏姝瑞;聶晶
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇迅睿生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京棘龍知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11740
• 代理人: 張開

本發(fā)明公開了一種磁珠法病毒核酸提取試劑盒以及使用方法，包括裂解液、磁珠液、洗滌液Ⅰ、洗滌液Ⅱ、洗滌液Ⅲ及洗脫液，所述所述裂解液由以下物質(zhì)組成：Tris?HCl，硫氰酸胍，EDTA，Triton?100，PEG?6000，SDS，異丙醇，水。本發(fā)明的有益效果是，本發(fā)明提供的裂解液，無需使用蛋白酶K從而節(jié)省成本，通常樣本裂解時需要加熱裂解，會加速有機溶劑的揮發(fā)，對操作人員的健康有危害，本發(fā)明無需加熱裂解液，可減少對操作人員的危害。通過發(fā)明人研究裂解液的各組分配比，獲得了提取核酸的裂解液配方。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)療領(lǐng)域，特別是一種磁珠法病毒核酸提取試劑盒以及使用方法。

背景技術(shù)

近年來，分子生物學(xué)飛速發(fā)展，隨著PCR與PR-PCR在病毒檢測的應(yīng)用越來越廣泛，核酸提取工作量飛速增加，傳統(tǒng)的提取核酸方法步驟繁瑣，需要使用苯酚或氯仿等方法抽提，時間長且毒性大，且不支持自動化提取，從而導(dǎo)致不能滿足大批量疾病檢測的要求。

市面上也出現(xiàn)了比傳統(tǒng)核酸提取方法操作簡單便捷的核酸提取技術(shù)，主要包括：層析柱法與磁珠法。由于層析柱核酸提取技術(shù)需離心柱配套使用且需要自動化離心設(shè)備，成本較高，目前層析柱核酸提取仍以手工提取為主，效率低。

而磁珠法核酸提取，僅需要一種可用于核酸分離的磁珠與磁分離裝置（磁力架）即可提取，操作簡單，成本較低，并可進行自動化提取，實現(xiàn)大批量樣本抽提。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決上述問題，設(shè)計了一種磁珠法病毒核酸提取試劑盒以及使用方法。

實現(xiàn)上述目的本發(fā)明的技術(shù)方案為，本發(fā)明提供一種磁珠法病毒核酸提取試劑，其特征在于包括：裂解液、磁珠液、洗滌液Ⅰ、洗滌液Ⅱ、洗滌液Ⅲ及洗脫液。

第一方面，所述裂解液包括Tris-HCl、硫氰酸胍、EDTA、Triton-100、PEG-6000；SDS；異丙醇；其中Tris-HCl為0.1M-0.5M；硫氰酸胍為3-5M；EDTA為10-40mm；PEG-6000占總質(zhì)量的2-5%；SDS占總質(zhì)量1%-3%；Triton-100占總質(zhì)量的4.5-9%；異丙醇占總質(zhì)量的5-15%。

所述磁珠液為外購磁珠，磁珠濃度為20-50mg/mL

所述洗滌液Ⅰ包括Tris-HCl、鹽酸胍，其中鹽酸胍為1-3M,PH為5.0~7.0

所述洗滌液Ⅱ為60-75%乙醇

所述洗滌液Ⅲ為75~85%乙醇

所述洗脫液為TE緩沖液，包括EDTA、Tris-HCl

第二方面，本發(fā)明還提供了一種磁珠法病毒核酸提取試劑盒的使用方法，包括以下步驟：

向樣本中加入裂解液、磁珠，室溫混勻裂解

將裝有混合液的離心管置于磁力架，待磁珠完全被吸附后，棄掉上清液

加入所述洗滌液Ⅰ混勻后，將裝有混合液的離心管置于磁力架，待磁珠完全被吸附后，棄掉上清液

加入所述洗滌液Ⅱ混勻后，將裝有混合液的離心管置于磁力架，待磁珠完全被吸附后，棄掉上清液

加入所述洗滌液Ⅲ混勻后，將裝有混合液的離心管置于磁力架，待磁珠完全被吸附后，棄掉上清液

將磁珠晾干后，加入所述洗脫液，50-80℃溫育洗脫后，收集核酸液并保存。

一種磁珠法病毒核酸提取試劑盒，包括：試劑瓶、試劑密封帽以及密封結(jié)構(gòu)；

所述試劑瓶與實際密封帽之間通過螺紋嚙合，所述密封結(jié)構(gòu)位于密封帽與試劑瓶的瓶口之間；

所述試劑密封帽包含：密封面板、面板塞、彈性頂柱；

所述密封面板位于面板塞上，彈性頂柱位于密封帽與密封面板之間；

還包括：環(huán)狀密封盤、環(huán)形密封條、以及環(huán)形連接體；