[發明專利]一種GD2嵌合抗原受體及其應用

在審

• 申請號: 202210197703.2
• 申請日: 2022-03-02
• 公開（公告）號: CN114456270A
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發明（設計）人: 劉昱辰
• 申請（專利權）人: 北京美康基免生物科技有限公司
• 主分類號: C07K16/30
• 分類號: C07K16/30;C12N15/13;C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 潘登

本發明提供了一種GD2嵌合抗原受體及其應用，所述人源化的GD2的scFv抗體具有結合GD2抗原的活性；所述人源化的GD2的scFv抗體的氨基酸序列與SEQ ID NO.1具有80％以上的同一性。本發明還提供了GD2嵌合抗原受體以及表達所述GD2嵌合抗原受體的嵌合抗原受體T細胞。本發明所述的人源化的GD2的scFv抗體具有更好的生物活性以及相容性；所述的GD2嵌合抗原受體與GD2結合后有更好的反應效果，免疫反應更強，且具有更好的長效性；所述的嵌合抗原受體T細胞具有更高的安全性與持久性，應用價值極高。

技術領域

本發明屬于腫瘤免疫治療技術領域，尤其涉及一種GD2嵌合抗原受體及其應用。

背景技術

隨著腫瘤免疫學理論和臨床技術的發展，嵌合抗原受體T細胞療法(Chimericantigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)成為目前最有發展前景的腫瘤免疫療法之一。一般情況下，嵌合抗原受體CAR由一個腫瘤相關抗原結合區、胞外鉸鏈區、跨膜區域以及胞內信號轉導區組成。通常，CAR包含抗體的單鏈片段可變(Single chain fragmentvariable，scFv)區或對腫瘤相關抗原(tumor associated antigen，TAA)具有特異性的結合結構域，其通過鉸鏈和跨膜區與T細胞信號傳導分子的胞質結構域偶聯。最常見的淋巴細胞活化部分包括與T細胞效應物功能觸發(例如CD3ζ)部分串聯的T細胞共刺激結構域。

CAR介導的過繼性免疫療法允許CAR移植的T細胞以非HLA限制性的方式直接識別靶腫瘤細胞上的TAA。目前，CAR-T的治療在血液腫瘤上取得了令人振奮的效果，二代CD19CAR-T在復發難治的B系急性淋巴細胞白血病、慢性淋巴白血病以及淋巴瘤上都被證實有抗腫瘤的功效，整體反應率根據腫瘤的不同約在50％～90％之間。

GD2(Disialoganglioside 2，神經節苷酯2)廣泛地表現在神經母細胞瘤、黑色素瘤、腦膠質瘤與肉瘤等腫瘤當中，在正常組織中低量且局限性地表達，是一種免疫治療理想的腫瘤抗原。目前此癌癥抗原最多應用于神經母細胞瘤的治療當中，此為兒童最常見的顱外實體惡性腫瘤，其中約50％的病童發病后，即有腫瘤大規模的擴散與轉移，常規的手術、化療、放療與自體干細胞移植對于這群病人的治療效果有限，即使在控制病情達到緩解后，也有80％以上的病人會于一年內復發并且死亡。

目前在神經母細胞瘤的免疫治療中，發展較為成熟的有針對GD2的抗體治療，這一方式在臨床上取得了初步的成功，但已發表的臨床研究報告指出，GD2單抗治療毒性較大，有52％的患者會產生三到四級的毒性反應，部分患者出現神經毒性。除此之外，抗體施打后存在于外周血中，較難精準地進入腫瘤組織或腫瘤微小殘留的部位，且無法長期存在體內。因此，制備一種嵌合抗原受體GD2 CAR-T細胞，除了具有抗體治療的優點，且由于T細胞本身的特性，可精準地進入腫瘤組織，并長期存在于體內，能為復發難治的神經母細胞瘤病童提供一個更有效的治療選擇。目前通過GD2 CAR-T治療神經母細胞瘤的臨床報導皆初步顯示了CAR-T的有效性，但仍缺乏長期觀察的數據。

目前，CAR-T技術治療實體腫瘤的效果并不十分理想，許多CAR-T的scFv區域多從鼠源的抗體衍生而來，鼠源scFv容易遭到人類免疫系統的排斥，造成CAR-T于體內無法長期存在，從而使治療效果受限。有報導指出，這也是許多急性淋巴細胞白血病的病人在使用CD19 CAR-T完全緩解后又復發的原因之一，且也造成了再治療的困難性。

因此，如何提供治療效果好、持續時間長的人源化的GD2 CAR-T，已成為亟待解決的問題。

發明內容

針對現有技術的不足和實際需求，本發明提供一種GD2嵌合抗原受體及其應用，含有所述的GD2嵌合抗原受體的CAR-T可以清除GD2陽性的實體腫瘤，有效清除骨髓中的微小殘留，且沒有發生不良反應，結合優化的T細胞訊息傳導區域，提高了CAR-T的安全性、有效性、記憶性以及長期維持性。

為達此目的，本發明采用如下技術方案：