[發(fā)明專利]一種毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗及其制備方法和應(yīng)用在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202210194522.4 | 申請(qǐng)日： | 2022-03-01 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN114525287A | 公開(kāi)（公告）日： | 2022-05-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 周德榮;譚志堅(jiān);劉葉萍;林瑞慶;翁亞彪;劉麗丹;劉園;鄺春曼;尚志祥 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 佛山市正典生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類(lèi)號(hào)： | C12N15/30 | 分類(lèi)號(hào)： | C12N15/30;C12N15/70;A61K39/012;A61P33/02 |
| 代理公司： | 北京品源專利代理有限公司 11332 | 代理人： | 潘登 |
| 地址： | 528138 廣東省*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 毒害 艾美耳球蟲(chóng) sag20 抗原 單位 疫苗 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.一種核酸分子，其特征在于，所述核酸分子編碼毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20蛋白；
所述核酸分子包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。
2.一種重組載體，其特征在于，所述重組載體包括至少一個(gè)拷貝的權(quán)利要求1所述的核酸分子；
優(yōu)選地，所述重組載體的骨架包括pET-30a質(zhì)粒。
3.一種毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗，其特征在于，所述毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗包括毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20蛋白，所述毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20蛋白為由權(quán)利要求2所述的重組載體誘導(dǎo)表達(dá)得到的重組蛋白。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗，其特征在于，所述重組蛋白的濃度為0.1～3.0mg/mL。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗，其特征在于，所述毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗還包括佐劑；
優(yōu)選地，所述佐劑包括完全弗氏佐劑或不完全弗氏佐劑；
優(yōu)選地，所述佐劑與所述重組蛋白的質(zhì)量比為1:(0.5～3.0)。
6.一種藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物包括權(quán)利要求3～5中任一項(xiàng)所述的毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗。
7.一種權(quán)利要求3～5中任一項(xiàng)所述的毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：
(1)構(gòu)建權(quán)利要求2所述的重組載體；
(2)將步驟(1)所述的重組載體轉(zhuǎn)入感受態(tài)細(xì)胞中，篩選陽(yáng)性克隆后進(jìn)行培養(yǎng)，裂解細(xì)胞，得到裂解液；
(3)從步驟(2)所述的裂解液中提取和純化蛋白質(zhì)，得到所述重組蛋白；
(4)將步驟(3)所述的重組蛋白與佐劑混合，得到所述毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗的制備方法，其特征在于，步驟(1)中，所述重組載體的構(gòu)建方法包括如下步驟：
將編碼毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20蛋白的核酸分子插入pET-30a質(zhì)粒的NdeⅠ和HindⅢ酶切位點(diǎn)之間，構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-30a-SAG20。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述感受態(tài)細(xì)胞包括BL21感受態(tài)細(xì)胞；
優(yōu)選地，步驟(2)中，所述裂解細(xì)胞的方法包括超聲破碎；
優(yōu)選地，步驟(3)中，所述提取和純化采用如下步驟進(jìn)行：
將所述裂解液離心收集上清液，并對(duì)所述上清液進(jìn)行過(guò)濾，將過(guò)濾后的上清液加入活化后的固定層析柱中，加入洗脫液，收集目標(biāo)蛋白。
10.權(quán)利要求1所述的核酸分子、權(quán)利要求2所述的重組載體、權(quán)利要求3～5中任一項(xiàng)所述的毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗、權(quán)利要求6所述的藥物組合物或權(quán)利要求7～9中任一項(xiàng)所述的毒害艾美耳球蟲(chóng)SAG20抗原亞單位疫苗的制備方法中任意一種或至少兩種的組合在制備球蟲(chóng)病治療藥物和/或疫苗中的應(yīng)用。
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