[發(fā)明專利]一種鼠抗OXA-48型碳青霉烯酶雜交瘤細(xì)胞株，單克隆抗體及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202210189253.2
• 申請(qǐng)日: 2022-03-01
• 公開（公告）號(hào): CN114317454B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李可可;苑慶華;何永勝;陳曉玲;周躍輝;樊琳琳;劉騫;王亞苗;孔迪;王思怡
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津一瑞生物科技股份有限公司;北京金山川科技發(fā)展有限公司;天津喜諾生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/20
• 分類號(hào): C12N5/20;C07K16/40;C12N15/13;G01N33/577;G01N33/573
• 代理公司: 天津諾德知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 12213
• 代理人: 欒志超;王旭

本發(fā)明提供鼠抗OXA?48型碳青霉烯酶雜交瘤細(xì)胞株，單克隆抗體及應(yīng)用，通過小鼠雜交瘤單克隆抗體篩選及RT?PCR法克隆Ig可變區(qū)基因，獲得穩(wěn)定分泌鼠抗OXA?48型碳青霉烯酶抗體的雜交瘤細(xì)胞株及其可變區(qū)序列；通過系統(tǒng)性評(píng)價(jià)，鼠抗OXA?48型碳青霉烯酶抗體在各方面均有較佳表現(xiàn)，效價(jià)達(dá)到了1:1280000以上，適合作為免疫診斷試劑用于制備碳青霉烯酶耐藥菌株體外診斷試劑盒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于抗體制備技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種鼠抗OXA-48型碳青霉烯酶雜交瘤細(xì)胞株，單克隆抗體及應(yīng)用。

背景技術(shù)

碳青霉烯酶是一種β-內(nèi)酰胺酶，有較高的水解碳青霉烯類抗生素的能力，按Ambler 分子結(jié)構(gòu)分為A 類、B 類和D 類三類酶，A 類酶包括KPC，B 類酶包括NDM、IMP、VIM和GIM 等，D 類酶有OXA 等，其中OXA-48 型酶在碳青霉烯類耐藥中顯示出愈來(lái)愈重要的作用，在全球各地關(guān)于其在腸桿菌科耐藥的報(bào)道日漸增多。2001 年P(guān)oirel L等發(fā)現(xiàn)了一種新型的β-內(nèi)酰胺酶基因，即blaOXA-48 基因，該基因在一株幾乎對(duì)所有β-內(nèi)酰胺類藥物耐藥的肺炎克雷伯菌中發(fā)現(xiàn)。自O(shè)XA-48被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，過去10余年中，產(chǎn)OXA-48 細(xì)菌在地中海地區(qū)的檢出率不斷增加，成為主要流行地區(qū)，隨后OXA-48 在墨西哥、利比亞、埃及、突尼斯和印度等國(guó)家相繼被報(bào)道，近幾年，在美國(guó)和中國(guó)臺(tái)灣也陸續(xù)出現(xiàn)。

實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)碳青霉烯酶的方法眾多，主要包括改良Hodge試驗(yàn)、Carba NP試驗(yàn)、改良碳青霉烯滅活試驗(yàn)（modified carbapenem inactivation method，mCIM）、酶抑制劑增強(qiáng)試驗(yàn)、免疫金標(biāo)試驗(yàn)以及分子生物學(xué)方法等。免疫診斷試劑是體外診斷試劑中發(fā)展最快的細(xì)分領(lǐng)域，利用抗原與抗體之間的特異性結(jié)合進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。研發(fā)具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的碳青霉烯酶快速診斷產(chǎn)品對(duì)于耐藥菌株的早期分型、指導(dǎo)用藥，提高我國(guó)的醫(yī)療衛(wèi)生水平具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種鼠抗OXA-48型碳青霉烯酶雜交瘤細(xì)胞株，單克隆抗體及應(yīng)用。

本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種鼠抗OXA-48型碳青霉烯酶雜交瘤細(xì)胞株，命名為IB5，保藏編號(hào)為CGMCC No.20284；或者命名為IH3，保藏編號(hào)為CGMCC No.20283。

一種鼠抗OXA-48型碳青霉烯酶抗體，抗體IB5，包括輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)，輕鏈可變區(qū)包括如SEQ ID NO:1所示的CDRL1、SEQ ID NO:2所示的CDRL2和SEQ ID NO:3所示的CDRL3，重鏈可變區(qū)包括如SEQ ID NO:4所示的CDRH1、SEQ ID NO:5所示的CDRH2和SEQ IDNO:6所示的CDRH3；

SEQ ID NO:1 RASKSISKYLA（CDRL1）

SEQ ID NO:2 SGSTFQS（CDRL2）

SEQ ID NO:3 QQHNEYPYVT（CDRL3）

SEQ ID NO:4 GFTFSTYAMS（CDRH1）

SEQ ID NO:5 TISSGGSYTSYPDSVKG（CDRH2）

SEQ ID NO:6 RPEYAMDY（CDRH3）

或者，

抗體IH3，輕鏈可變區(qū)包括如SEQ ID NO:11所示的CDRL1、SEQ ID NO:12所示的CDRL2和SEQ ID NO:13所示的CDRL3，重鏈可變區(qū)包括如SEQ ID NO:14所示的CDRH1、SEQ IDNO:15所示的CDRH2和SEQ ID NO:16所示的CDRH3；

SEQ ID NO:11 RASKSVSTSGYSYMH（CDRL1）

SEQ ID NO:12 LVSNLES（CDRL2）

SEQ ID NO:13 QHIRELYT（CDRL3）

SEQ ID NO:14 GYTFTDYVIS（CDRH1）