[發明專利]一種探針引物及其用于平貝母專屬性檢測的熒光定量PCR檢測方法和用途

在審

• 申請號: 202210187701.5
• 申請日: 2022-02-28
• 公開（公告）號: CN114540346A
• 公開（公告）日: 2022-05-27
• 發明（設計）人: 張文娟;魏鋒;馬雙成;程顯隆;石巖;于健東;陸以云
• 申請（專利權）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6895;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京攀騰專利代理事務所(普通合伙) 11374
• 代理人: 彭蓉;游舜華

1.一種探針引物，其特征在于，所述探針引物是由SEQ ID NO：28-39所示的DNA序列組成。

2.一種用于平貝母專屬性檢測的熒光定量PCR檢測方法，其特征在于，包括下述步驟：

稱取貝母樣品及樣品前處理；

從所述樣品中提取DNA并制備DNA模板；及

選擇探針引物；

優化反應條件；

根據不同的檢測需求，設定不同的判定依據；其中對于定性檢測，根據設定的CT值臨界點判定是否檢出；對于半定量檢測，根據與陽性對照的CT值之差的絕對值作為判定依據，差值越小，含量越高；對于定量檢測，一方面同時設置標準品(S)，另一方面采用同體系中雙探針標記進行擴增，即包括目的探針(P)和內參探針(C)；供試品中專屬探針(P)和通用探針(C)的定量檢測比值可表示為△CT(T)，相應的標準品可表示為△CT(S)，△△CT＝△CT(T)-△CT(S)從而目的DNA(平貝母)所占比例計算公式可表示為：

其中，所述方法能夠用于檢測所述樣品中是否含有平貝母；所述探針引物為權利要求1所述的探針引物。

3.根據權利要求2所述的方法，其中每組探針引物包括三個序列，并且當任何一組用于檢測時其中所包括的三個序列是同時使用而不拆分。

4.根據權利要求2所述的方法，其中所述樣品為中藥材、飲片或成方制劑。

5.根據權利要求2所述的方法，其中所述提取DNA的步驟采用紫外分光光度法進行定量和純度測定。

6.根據權利要求2所述的方法，其中所述反應條件包括：94℃預變性5min，94℃變性30s，60℃退火30～60s，60℃收集熒光。根據所選反應預混液性質的不同，反應條件可進行調整。

7.一種探針引物的用途，其特征在于，所述探針引物為權利要求1所述的探針引物；所述探針引物通過熒光定量PCR檢測方法實現平貝母專屬性檢測。

8.根據權利要求7所述的用途，其中每組探針引物包括三個序列，并且當任何一組用于檢測時其中所包括的三個序列是同時使用而不拆分。

9.根據權利要求7所述的用途，其中檢測的樣品為中藥材、飲片或成方制劑。

10.一種試劑盒，其特征在于，含有權利要求1所述的探針引物，并且所述試劑盒用于平貝母專屬性檢測。