[發明專利]基于轉肽酶的化學酶法的蛋白質半合成

在審

• 申請號: 202210184235.5
• 申請日: 2022-02-24
• 公開（公告）號: CN114480534A
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 劉磊;左沖;孫德猛;丁睿超;吳祥偉;梁陸軍
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02;C07K19/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 黃德海

1.一種連接多肽或蛋白的方法，其特征在于，將第一多肽或第一蛋白與第二多肽或第二蛋白在轉肽酶的作用下進行連接處理，以便獲得連接肽或蛋白，所述第一多肽或第一蛋白的C末端與所述第二多肽或第二蛋白的N末端連接；

其中，所述第一多肽或第一蛋白的C末端氨基酸P1的羧基與帶有游離巰基的化合物通過硫酯鍵相連；

所述第二多肽或第二蛋白的N末端為甘氨酸。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述帶有游離巰基的化合物包括選自巰基乙酸甲酯、巰基乙酸、N-甲基-硫代乙酰胺、巰基乙基磺酸鈉、4-巰基苯基乙酸、2,2,2-三氟乙硫醇、2-巰基乙酸乙酯、3-巰基丙酸和3-巰基丙酸甲酯中的任意一種。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述轉肽酶包括sortase A、sortase B、sortase C、sortase D、sortase E、sortase F中的至少之一。

4.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，所述轉肽酶選自sortase A，所述第一多肽或第一蛋白的C末端氨基酸前四位氨基酸序列為P1P2P3P4，其中，所述P2選自任意一種氨基酸，所述P4為亮氨酸，所述P3為脯氨酸，所述P1為蘇氨酸，或所述P4、P3和P1中的至少一個氨基酸發生替換；

任選地，所述P4、P3和P1中的一個氨基酸發生替換；

其中，所述P2選自任意一種氨基酸，所述P4的亮氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸，所述P3為脯氨酸，所述P1為蘇氨酸；或，

所述P2選自任意一種氨基酸，所述P3的脯氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸，所述P4為亮氨酸，所述P1為蘇氨酸；或，

所述P2選自任意一種氨基酸，所述P1的蘇氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸，P4為亮氨酸，P3為脯氨酸；

任選地，所述P4、P3和P1中的兩個氨基酸發生替換；

其中，所述P2選自任意一種氨基酸，所述P4為亮氨酸，所述P3的脯氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸，所述P1的蘇氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸；或，

所述P2選自任意一種氨基酸，所述P3為脯氨酸，所述P4的亮氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸，所述P1的蘇氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸；或，

所述P2選自任意一種氨基酸，所述P1為蘇氨酸，所述P4的亮氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸，所述P3的脯氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸；

任選地，所述P4、P3和P1中的三個氨基酸均發生替換；

其中，所述P2選自任意一種氨基酸，所述P4的亮氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸，所述P3的脯氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、蘇氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸，所述P1的蘇氨酸替換為賴氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、絲氨酸、甘氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、谷氨酸、組氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、纈氨酸、β-苯丙氨酸、2,3-二氨基丙酸、正亮氨酸或鳥氨酸。