[發(fā)明專利]一種人源膜聯(lián)蛋白人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)及其解析方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202210178427.5
• 申請日: 2022-02-24
• 公開（公告）號: CN114437197A
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發(fā)明（設計）人: 華子春;唐薇
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇靶標生物醫(yī)藥研究所有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;G16C20/50
• 代理公司: 江蘇銀創(chuàng)律師事務所 32242
• 代理人: 何震花

1.一種人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)，其特征在于：所述的人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)，其特征在于：所述的人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)的一個晶格由4個蛋白分子組成，分別為：chain A、chain B、chain C、chain D；所述的蛋白晶體每個單分子含有4個repeat，所述的每個repeat由5個α螺旋和連接它們的loop組成。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)，其特征在于：所述的每個repeat由約70個氨基酸組成的5個α螺旋和連接其的loop組成，屬于一種典型的膜聯(lián)蛋白Annexins家族類蛋白。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)，其特征在于：所述的人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)的晶型外形為塊狀晶體，空間群為P21212；所述的人源膜聯(lián)蛋白TP25S的晶體結(jié)構(gòu)的晶胞參數(shù)為a為b為c為α＝β＝γ＝90°。

5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)，其特征在于：所述的chain A-chain D，chain B-chain C，chain C-chain A之間形成強分子間作用力。

6.權(quán)利要求1至5任一項所述的人源膜聯(lián)蛋白人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)的解析方法，其特征在于包括如下步驟：從母液中可以獲得晶體，利用液態(tài)氮氣流快速冷凍，在100K下利用X射線源獲得的晶體數(shù)據(jù)，具體過程如下：

首先使用的尼龍晶體環(huán)，從晶體浸泡液中獲取適宜X射線衍射的晶體，并迅速使用冷卻系統(tǒng)產(chǎn)生的低溫氮氣流中冷凍至零下150-180℃；使X射線通過晶體，利用旋進法收集X射線衍射數(shù)據(jù)；收集到晶體的X射線衍射數(shù)據(jù)后，按照下述步驟進行相應的數(shù)據(jù)處理：(1)使用HKL2000等軟件對上一步驟中收集得到的衍射數(shù)據(jù)進行處理，獲得完整的數(shù)據(jù)文件；(2)使用CCP4程序包中的Phaser、Molrep軟件，利用分子置換方法，以已知的膜聯(lián)蛋白的結(jié)構(gòu)為搜索模型，制得人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)。

7.權(quán)利要求1至5任一項所述的人源膜聯(lián)蛋白人源膜聯(lián)蛋白A5突變體二聚體的晶體結(jié)構(gòu)在制備檢測試劑、診斷試劑盒、藥物靶點篩選和治療藥物中的應用。