[發明專利]利用木粉混合固態發酵生產真菌水溶性紅色素的方法

有效

• 申請號: 202210175010.3
• 申請日: 2022-02-25
• 公開（公告）號: CN114540425B
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 孫建平;蘇子華;宋太澤
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12P1/02
• 分類號: C12P1/02;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司 45104
• 代理人: 黃永校

1.一種利用木粉混合固態發酵生產真菌水溶性紅色素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將泡桐和甘蔗渣切成長寬為1-2cm，厚度為1-2mm的木片，放至102℃烘箱中烘干至恒重，然后將木片粉碎，再用100目篩網進行篩慮，將篩出的木粉放入儲存罐中，然后用高壓滅菌鍋于121℃、0.1MPa下固體滅菌40min，冷卻后得到預處理木粉；

(2)將菌種活化，用接種鏟挑取梨孢假殼科(Arthroinium?phaeospermum)SHL-1真菌菌塊接種于PDA培養基中，封口后置于20±2℃的恒溫恒濕培養箱中黑暗培養14天，菌絲布滿90mm培養皿后將培養皿放入4℃冰箱中作為實驗菌種，該菌株于2018年12月17日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為：CCTCC?No：M?2018900，保藏地址：武漢市武昌珞珈山武漢大學；

(3)按照一定的濃度和配比分別稱取泡桐和甘蔗渣粉末，加入至錐形瓶中，再向錐形瓶中倒入PDA培養基中，混合均勻后，封口，用高壓滅菌鍋于121℃、0.1MPa下液體滅菌20min，冷卻至80℃，在超凈工作臺中用無菌注射器將搖晃均勻的培養基按20mL/皿的量移至90mm培養皿中，冷卻30min后得到木粉混合培養基；

(4)在超凈工作臺中用打孔器將步驟(2)中的菌種打出直徑為6mm的菌餅，然后用接種針將菌餅接種至(3)中所述的木粉混合培養基中心，封口后置于20±2℃的恒溫恒濕培養箱中黑暗培養發酵14天；

(5)將步驟(4)中發酵結束的培養基切成1cm²小塊，倒入燒杯中，按照蒸餾水：培養基＝3:1的液料比加入蒸餾水，保鮮膜封口后將燒杯放至超聲清洗機中60℃超聲提取30min，提取兩次，然后用0.22μm濾膜過濾，裝瓶放至-60℃冰箱冷凍24h，然后連續冷凍干燥36h，得到水溶性紅色素粉末。

2.根據權利要求1所述利用木粉混合固態發酵生產真菌水溶性紅色素的方法，其特征在于，步驟(1)中所述泡桐為產自山東菏澤的泡桐邊材，甘蔗渣為廣西產的黑甘蔗榨去糖分和甘蔗皮后剩下的白色甘蔗渣。

3.根據權利要求1所述利用木粉混合固態發酵生產真菌水溶性紅色素的方法，其特征在于，步驟(2)中所用PDA培養基在使用時按照46.1g/L的比例將PDA粉末與去離子水混合并煮沸，高溫滅菌后使用。

4.根據權利要求1所述利用木粉混合固態發酵生產真菌水溶性紅色素的方法，其特征在于，步驟(3)中木粉在培養基中的濃度為3～5mg/mL,泡桐和甘蔗渣粉末濃度配比為3mg/mL+3mg/mL～5mg/mL+5mg/mL，木粉混合培養基在滅菌之前混合均勻至木粉完全懸浮于PDA培養基內。

5.根據權利要求1所述利用木粉混合固態發酵生產真菌水溶性紅色素的方法，其特征在于，步驟(4)中打孔器和接種針用酒精燈燒紅并冷卻至常溫后使用，接種時將菌餅中帶有菌絲的一面朝下進行接種，全程在超凈工作臺中進行。

6.根據權利要求1所述利用木粉混合固態發酵生產真菌水溶性紅色素的方法，其特征在于，步驟(5)中色素提取液冷卻后再進行過濾，冷凍時色素溶液是裝在20mL樣品瓶中，每瓶色素溶液不超過10mL。

7.根據權利要求2所述利用木粉混合固態發酵生產真菌水溶性紅色素的方法，其特征在于，超凈工作臺在紫外滅菌30min后使用。