[發(fā)明專利]基于多肽納米漆酶的福美雙現(xiàn)場檢測傳感器及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210171274.1
• 申請日: 2022-02-24
• 公開（公告）號: CN114457050A
• 公開（公告）日: 2022-05-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 盧革宇;閆旭;李愛心;孫鵬;劉方猛;王晨光;劉曉敏;高原;梁喜雙;劉鳳敏
• 申請（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號: C12N9/02
• 分類號: C12N9/02;C12Q1/26;G01N21/78
• 代理公司: 長春吉大專利代理有限責(zé)任公司 22201
• 代理人: 劉世純;王恩遠

1.一種模擬天然漆酶活性的基于多肽納米漆酶的福美雙現(xiàn)場檢測傳感器的制備方法，其步驟如下：

(1)將0.24mol L^-1的CuCl₂水溶液、0.12mol L^-1的谷胱甘肽水溶液、N,N-二甲基甲酰胺溶液以體積比1：2：4的比例混合均勻，然后將得到的混合物溶液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜中，在130～150℃下恒溫反應(yīng)4～5h；待反應(yīng)釜冷卻至室溫后，將反應(yīng)產(chǎn)物多次離心，再分別用N,N-二甲基甲酰胺溶液和去離子水洗滌3～5次；最后，將洗滌產(chǎn)物冷凍干燥，得到多肽納米漆酶凍干粉末；再將得到的多肽納米漆酶粉末用去離子水溶解，超聲15～30min得到濃度為0.05～0.15mg mL^-1的多肽納米漆酶溶液；

(2)取25μL、濃度0.05～0.15mg mL^-1多肽納米漆酶的去離子水溶液與50μL、濃度2.5～250μg L^-1福美雙的丙酮溶液在37℃下反應(yīng)20～30min；再加入100μL、1mg mL^-1的2,4-二氯苯酚水溶液，100μL、1mg mL^-1的4-氨基安替比林水溶液和100μL MES水溶液作為顯色底物溶液，在50～70℃下反應(yīng)40～80min；使用紫外分光光度計測量溶液在510nm處吸收光譜的峰值，建立“農(nóng)藥抑制率(A/A₀)與福美雙濃度的關(guān)系曲線”，從而得到基于多肽納米漆酶的福美雙現(xiàn)場檢測傳感器；其中，農(nóng)藥抑制率(A/A₀)中的A是指在不同福美雙濃度下溶液在510nm處吸收光譜的峰值，A₀是指在福美雙濃度為0的條件下溶液在510nm處吸收光譜的峰值。

2.一種模擬天然漆酶活性的基于多肽納米漆酶的福美雙現(xiàn)場檢測傳感器，其特征在于：是由權(quán)利要求1所述的方法制備得到。

3.一種模擬天然漆酶活性的基于多肽納米漆酶的福美雙現(xiàn)場檢測紙基比色傳感器的制備方法，其步驟如下：

(1)將0.24mol L^-1的CuCl₂水溶液、0.12mol L^-1的谷胱甘肽水溶液、N,N-二甲基甲酰胺溶液以體積比1：2：4的比例混合均勻，然后將得到的混合物溶液轉(zhuǎn)移到聚四氟乙烯內(nèi)襯的不銹鋼反應(yīng)釜中，在130～150℃下恒溫反應(yīng)4～5h；待反應(yīng)釜冷卻至室溫后，將反應(yīng)產(chǎn)物多次離心，再分別用N,N-二甲基甲酰胺溶液和去離子水洗滌3～5次；最后，將洗滌產(chǎn)物冷凍干燥，得到多肽納米漆酶凍干粉末；再將得到的多肽納米漆酶粉末用去離子水溶解，超聲15～30min得到濃度為0.05～0.15mg mL^-1的多肽納米漆酶溶液；

(2)將20μL、濃度0.05mg mL^-1～0.15mg mL^-1多肽納米漆酶的去離子水溶液滴在吸水試紙上，室溫下晾干；再向吸水試紙滴入20μL、濃度0.0125～2.5mg L^-1福美雙的丙酮溶液，在37℃下反應(yīng)8～15min；再滴入1mg mL^-1 2,4-二氯苯酚水溶液，1mg mL^-1 4-氨基安替比林水溶液和MES水溶液作為混合顯色底物溶液，混合顯色底物溶液中3種溶液的體積比例為1：1：1，混合顯色底物溶液的總體積為20μL，在50～70℃下反應(yīng)15～30min，用手機記錄試紙的顏色變化；通過Image軟件將試紙的顏色信息轉(zhuǎn)化為灰度值，建立“灰度值與福美雙濃度對數(shù)的關(guān)系曲線”，從而得到基于多肽納米漆酶的福美雙現(xiàn)場檢測紙基比色傳感器。

4.一種模擬天然漆酶活性的基于多肽納米漆酶的福美雙現(xiàn)場檢測紙基比色傳感器，其特征在于：是由權(quán)利要求3所述的方法制備得到。