[發(fā)明專利]提高解脂耶氏酵母耐熱性的方法及用于發(fā)酵合成甘露醇

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210157542.4
• 申請日: 2022-02-21
• 公開（公告）號: CN114774447A
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設計）人: 程海榮;黃藝園;張馨月;鄒亞文;張悅;徐碩;徐一榕
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C12N15/64;C12N15/31;C12N15/01;C12N13/00;C12N1/02;C12P7/18;C12R1/73
• 代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236
• 代理人: 胡晶

1.一種提高解脂耶氏酵母熱耐受性的方法，其特征在于，包括在解脂耶氏酵母中提高熱激蛋白基因或熱激蛋白基因調控因子的表達；或對解脂耶氏酵母進行誘變，獲得熱耐受性。

2.根據(jù)權利要求1所述的提高解脂耶氏酵母熱耐受性的方法，其特征在于，所述熱激蛋白基因選自內源性或外源性熱激蛋白基因；所述內源性熱激蛋白基因包括ylhsp12、ylhsp72、ylhsp75、ylhsp90或ylhsp104，所述外源性熱激蛋白基因包括Schsp90、Blhsp90；所述熱激蛋白基因調控因子包括內源性或外源性熱激蛋白基因調控因子；所述內源性熱激蛋白基因調控因子包括ylmsn5、yltps2、yltah1、ylhsf12或yltps1，所述外源性熱激蛋白基因調控因子包括釀酒酵母的tah1熱激蛋白調控因子、枯草芽孢桿菌熱激蛋白調控因子或嗜熱鏈球菌來源的轉錄調控因子。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的提高解脂耶氏酵母熱耐受性的方法，其特征在于，獲得的熱激蛋白基因或熱激蛋白基因調控因子過表達菌株，經34-37℃耐熱篩選，獲得高熱耐受性解脂耶氏酵母。

4.根據(jù)權利要求3所述的提高解脂耶氏酵母熱耐受性的方法，其特征在于，熱激蛋白基因過表達菌株的構建包括如下步驟：

S1、構建hsp基因表達盒，含解脂酵母的啟動子序列、hsp基因序列和終止子序列；

S2、構建hsp基因的表達載體序列，含上游同源臂序列、所述hsp基因表達盒和下游同源臂序列；

S3、合成的全序列連接到克隆載體，轉化到大腸桿菌中擴增質粒；

S4、酶切質粒，轉化出發(fā)菌株；34-37度培養(yǎng)篩選能長出單菌落。

5.根據(jù)權利要求4所述的提高解脂耶氏酵母熱耐受性的方法，其特征在于，熱激蛋白基因調控因子過表達菌株的構建包括如下步驟：全序列合成熱激蛋白基因調控因子，以SacI與XhoI雙切，克隆到SacI與XhoI雙切的步驟S3獲得的載體中。

6.根據(jù)權利要求1所述的提高解脂耶氏酵母熱耐受性的方法，其特征在于，所述誘變包括ARTP常溫等離子體誘變；誘變后的菌株經34-37度高溫培養(yǎng)，篩選有單菌落長出的突變株；經34-37℃耐熱篩選，獲得高熱耐受性解脂耶氏酵母。

7.一種根據(jù)權利要求1-6中任一項所述的方法獲得的高熱耐受性解脂耶氏酵母菌株。

8.一種耐熱菌株解脂耶氏酵母Yarrowia lipolytica，其保藏編號為CGMCC No.24239。

9.一種利用權利要求7或8所述的菌株發(fā)酵合成甘露醇的方法。

10.根據(jù)權利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法還包括從菌株發(fā)酵液中提取純化甘露醇的步驟。