[發明專利]一種CAR細胞療法用核酸構建體及其慢病毒載體、細胞制劑和應用

在審

• 申請號: 202210148733.4
• 申請日: 2022-02-18
• 公開（公告）號: CN114891115A
• 公開（公告）日: 2022-08-12
• 發明（設計）人: 陳偉;劉昊
• 申請（專利權）人: 杭州美中疾病基因研究院有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/867;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 杭州中利知識產權代理事務所(普通合伙) 33301
• 代理人: 肖洋

1.一種CAR細胞療法用核酸構建體，其特征在于：包括依次串連的信號肽、抗原結合區、胞外鉸鏈區、跨膜結構域和胞內信號域；

所述信號肽為Human IgKVIII、Human IL-2或Human insulin；

所述抗原結合區為anti-CD19 scFv、anti-Her-2scFv、anti-ROR1 scFv或anti-BCMAscFv；

所述胞外鉸鏈區為來自CD8、CD28、CTLA4、PD-1、NKG2D、IgG1、含CH2CH3區域的IgG4或不含CH2CH3區域的IgG4的鉸鏈區序列；

所述跨膜結構域為來自T細胞受體的α、β或ζ鏈、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137、CD154、DAP10、DAP12、NKG2A、NKG2D、PD-1或CTLA的跨膜結構域序列；

所述胞內信號域由DAP10 CD、CD137 CD和CD3ζSD所組成。

2.如權利要求1所述的一種CAR細胞療法用核酸構建體，其特征在于：所述信號肽為CD8SP，所述CD8 SP的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

3.如權利要求1所述的一種CAR細胞療法用核酸構建體，其特征在于：所述抗原結合區為Her-2scFv，所述Her-2scFv的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.3和SEQID NO.4所示。

4.如權利要求1所述的一種CAR細胞療法用核酸構建體，其特征在于：所述胞外鉸鏈區為CD8 H、CD28 H或IgG4 H-CH2-CH3，所述CD8 H的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，所述CD28H的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQID NO.7和SEQ ID NO.8所示，所述IgG4 H-CH2-CH3的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。

5.如權利要求1所述的一種CAR細胞療法用核酸構建體，其特征在于：所述跨膜結構域為CD8 TMD、CD28 TMD或NKG2D TMD，所述CD8 TMD的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.11和SEQ ID NO.12所示，所述CD28 TMD的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.13和SEQ ID NO.14所示，所述NKG2D TMD的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.15和SEQ ID NO.16所示。

6.如權利要求1所述的一種CAR細胞療法用核酸構建體，其特征在于：所述DAP10 CD的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示，所述CD137 CD的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.19和SEQ ID NO.20所示，所述CD3ζSD的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28所示。

7.如權利要求6所述的一種CAR細胞療法用核酸構建體，其特征在于：所述胞內信號域的順序為DAP10 CD-CD137 CD-CD3ζSD，所述DAP10 CD-CD137CD-CD3ζSD的核酸序列和多肽序列分別如序列表中的SEQ ID NO.29和SEQ ID NO.30所示。

8.一種慢病毒載體，其特征在于：所述慢病毒載體包含如權利要求1至7中任一項所述的CAR細胞療法用核酸構建體的基因。

9.一種細胞制劑，其特征在于：所述細胞制劑為導入有權利要求8所述的慢病毒載體的免疫效應細胞，所述免疫效應細胞為T細胞、NK細胞或巨噬細胞，所述免疫效應細胞的來源為自體、同種異體、干細胞分化或特定細胞系。

10.如權利要求9所述的一種細胞制劑在癌癥治療中的應用。