[發明專利]Ndufs1基因在治療心梗后心衰中的應用和相關產品

有效

• 申請號: 202210143521.7
• 申請日: 2022-02-16
• 公開（公告）號: CN114507677B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發明（設計）人: 亓秉超;李妍;張明明;胡建強;胡朗;任高彤;彭庭偉;劉銘傳;郭棟
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍空軍軍醫大學
• 主分類號: C12N15/52
• 分類號: C12N15/52;C12N15/864;C12N5/10;A61K48/00;A61K38/43;A61P9/04;A61P9/10
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 張宇鴿

本發明公開一種Ndufs1基因在治療心梗后心衰中的應用和相關產品，Ndufs1的上調可顯著減少缺氧引起的細胞凋亡以及線粒體呼吸功能障礙，這對提高心肌細胞功能和減少細胞死亡極其有利，基于AAV的Ndufs1過表達載體可顯著改善心梗后心肌纖維化和心功能障。因此，針對Ndufs1這個新靶點，基于AAV的基因治療有望成為治療或預防心梗后心衰的有效手段。

技術領域

本發明屬于生物與新醫藥技術領域，具體屬于一種Ndufs1基因在治療心梗后心衰中的應用和相關產品。

背景技術

在全球范圍內，心血管疾病是最常見的死亡原因。心力衰竭是大多數心血管疾病的終末期表現，其長期預后較差，其5年死亡率超過一些常見癌癥。在過去的20年中，心肌梗死一直是心力衰竭的最常見原因。在心梗發生期間，血液供應的突然中斷或減少導致心肌細胞死亡或使剩余存活心肌細胞功能障礙。心梗后細胞凋亡和心肌纖維化是不良心肌重構的重要病理特征。雖然目前介入和藥物策略的進步已經為心?；颊邘砹溯^好的臨床結果，但心梗后心力衰竭的發病率和死亡率仍然很高。因此，尋找并確定新的治療靶點非常重要。

心臟收縮和舒張需要持續供應ATP，其中大部分來自線粒體中的氧化磷酸化。線粒體復合物I是線粒體呼吸鏈的起始酶和最大的酶，負責從NADH到輔酶Q10的電子轉移，并與質子從基質轉運到膜間隙的過程相耦合。哺乳動物復合體I由45個亞基組成；14個核心亞基中有7個由核基因編碼。Ndufs1是由核基因編碼的最大核心亞基，是八個鐵硫鏈的一部分，負責NADH的氧化。質子跨線粒體內膜易位產生電化學梯度，驅動復合體V中的ATP產生。作為同時產生ATP的副產品，活性氧也會在幾個線粒體復合體中產生，主要是復合體I。之前的一項研究表明，神經元中的Ndufs1超低導致耗氧量受損，線粒體活性氧增加；星形膠質細胞中上調的Ndufs1也減少了活性氧的產生。在從患有Ndufs1突變的患者身上獲得的皮膚成纖維細胞中，發現了高水平的氧化應激，伴隨著復合物I活性的降低、耗氧量的降低和糖酵解的增加。作為線粒體電子傳遞鏈(ETC)的起點，Ndufs1是ATP和活性氧產生的雙重“引擎”，并在多種疾病的代謝重編程、氧化應激和細胞凋亡中發揮重要作用。心臟是一個高耗能、富含線粒體的器官。Ndufs1在人類心臟中高度表達。然而，Ndufs1在心臟病中的作用及其潛在機制尚不清楚。

腺相關病毒(AAV)是一種線性單鏈的DNA病毒，是基因治療的重要工具，具有表達時間持久、安全性高、免疫原性低等優勢，已有大量的臨床前研究和臨床研究正在開展。不同血清型的AAV具有不同的組織特異性，可以實現組織特異性的基因遞送，逐漸成為一種理想的基因治療載體。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明提供一種Ndufs1基因在治療心梗后心衰中的應用和相關產品，基于AAV構建重組的Ndufs1過表達載體，通過胸腔注射等手段，實現小鼠心臟特異性表達，緩解小鼠心梗后心力衰竭。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

本發明提供了一種用于治療心梗后心衰的基因，所述基因為Ndufs1基因，Ndufs1基因的堿基序列如SEQ?ID?NO:1所示。

本發明提供了一種過表達質粒，將上述Ndufs1基因作為目的基因插入攜帶心臟特異性啟動子cTNT的質粒中構建得到。

進一步的，所述質粒為GV618，克隆位點為AgeI/HindIII，構建過表達質粒時，正向引物的堿基序列如SEQ?ID?NO:2所示，反向引物的堿基序列堿基序列如SEQ?ID?NO:3所示。

本發明提供了一種AAV過表達病毒載體，采用AAV9型病毒，由pHelper、pAAV-RC與上述過表達質粒共轉染AAV-293細胞得到。

本發明提供了一種細胞，所述細胞中含有上述的AAV過表達病毒載體。

本發明提供了上述過表達質粒、AAV過表達病毒載體或細胞在制備治療心梗后心衰的藥物或醫療器材中的用途。