[發明專利]一種靶向抗原同時外泌CD47抗體的免疫細胞及其應用

在審

• 申請號: 202210142794.X
• 申請日: 2022-02-16
• 公開（公告）號: CN114573710A
• 公開（公告）日: 2022-06-03
• 發明（設計）人: 李玉華;邱瑛琦;胡宇行;胡蓉;許斌焱;王浩;廖佩云
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學珠江醫院;生物島實驗室
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N5/10;C12N15/867;C12N7/01;A61K39/00;A61K39/395;A61P35/00;A61P35/02;C12R1/93
• 代理公司: 北京市誠輝律師事務所 11430
• 代理人: 范盈;李玉娜

本發明公開了腫瘤免疫細胞治療領域的一種靶向抗原同時外泌CD47抗體的免疫細胞及其應用。本發明一方面提供一種嵌合抗原受體，其由第一信號肽、抗原結合片段、鉸鏈區、跨膜區、胞內共刺激信號域、胞內域、自剪切序列、第二信號肽和抗CD47單鏈抗體依次串聯而成；另一方面提供一種靶向抗原同時外泌CD47抗體的免疫細胞，特別是嵌合抗原受體修飾的T細胞、NK細胞或NKT細胞。本發明將編碼抗原結合片段的第一核酸和編碼抗CD47單鏈抗體的第二核酸構建在同一個載體上，通過靶向抗原并外泌CD47抗體，可實現抗CD47抗體的局部遞送，減輕對正常細胞的影響，并有效拮抗腫瘤免疫微環境中的免疫抑制因素，阻斷腫瘤細胞的抗吞噬作用。

技術領域

本發明屬于腫瘤免疫細胞治療領域，具體涉及一種靶向抗原同時外泌CD47抗體的免疫細胞及其應用。

背景技術

作為一種新型靶向免疫療法，嵌合抗原受體修飾的T細胞(CAR-T)已在血液系統惡性腫瘤疾病中展現出了卓越療效。嵌合抗原受體(CARs)是將T細胞重新定位于腫瘤表面抗原的合成受體，主要由胞外抗原結合域、跨膜結構域和胞內結構域組成。胞外抗原結合域可特異性識別腫瘤抗原，并通過跨膜結構域連接胞內結構域，從而傳遞活化信號，促進T細胞的增殖與功能。經CAR修飾后的T細胞無須MHC分子的處理和遞呈便可識別腫瘤細胞的腫瘤抗原，特異性殺傷腫瘤細胞，在臨床上具有廣闊的應用前景。第一代CARs通常將抗體衍生的腫瘤結合元件連接到CD3ζ或Fc受體信號結構域以觸發T細胞活化，可在一定程度上殺傷腫瘤細胞，但效果并不十分理想，CART細胞存活時間較短。第二代和第三代治療則增加了CD28、4-1BB等共刺激分子，在很大程度上延長了T細胞存活時間并增強其效應子功能。

在用化療、放化療聯合以及造血干細胞移植等傳統方式治療難治復發白血病效果欠佳的情況下，CAR-T細胞治療是理想選擇。目前以CD19為靶點的CAR-T細胞在治療難治復發白血病和淋巴瘤患者中的應用最為廣泛，但病人在獲得高緩解率的同時伴隨著高復發率的風險。例如，CD19-CAR-T治療難治復發非霍奇金淋巴瘤已取得顯著療效，約50％的患者可獲得完全緩解，但其中約有55％在一年內復發；另外，由于免疫抑制性腫瘤微環境與抗原丟失等限制，與CD19-CAR-T在急性白血病中所取得的療效相比，其在實體腫瘤中的療效不佳。導致CD19-CAR-T治療復發的主要機制包括抗原反復刺激導致的免疫抑制性腫瘤微環境和腫瘤選擇性剪接導致的抗原逃逸。因此，為減少免疫抑制性TME對CAR-T細胞的抑制作用，減少治療復發，需要進一步改善現有CD19-CAR-T細胞的結構與功能以及治療策略，以期獲得更好的療效。

CD47是一種廣泛分布于正常細胞表面的蛋白質，其主要配體SIRPα在巨噬細胞、粒細胞、單核細胞等髓樣細胞的膜上高度表達。正常細胞表達CD47而標上自我標記，通過CD47/SIRPα軸釋放“don’t eat me”信號，抑制巨噬細胞介導的吞噬作用，保護正常細胞免遭破壞。研究表明，CD47在多種腫瘤如白血病、淋巴瘤中均有高表達。通過高表達CD47，癌細胞可偽裝成自身細胞釋放抗吞噬信號，抑制巨噬細胞介導的吞噬作用，發生免疫逃逸，從而促進腫瘤的進展擴散，與腫瘤患者的預后不良相關。此外，CD47的表達與PD-1、Treg標記Foxp3、MDSC標記CD11b和CD33的表達正相關。抗CD47處理可促使腫瘤小鼠模型體內的巨噬細胞向M1亞型極化，并降低腫瘤小鼠模型的效應T細胞中PD-1的表達并增加IFN-γ的分泌，減少免疫抑制性細胞Tregs和MDSCs的數量，以此改善腫瘤微環境，延緩腫瘤的生長。但是抗CD47單鏈抗體的自身特性導致其應用具有一定局限性，且存在靶向正常細胞的風險，造成細胞毒性反應。

發明內容

為了解決現有技術中的不足，本發明的目的在于提供一種靶向抗原同時外泌CD47抗體的免疫細胞及其應用。

本發明第一方面提供一種嵌合抗原受體，由第一信號肽、抗原結合片段、鉸鏈區、跨膜區、胞內共刺激信號域、胞內域、自剪切序列、第二信號肽和抗CD47單鏈抗體依次串聯而成。

進一步地，所述抗原結合片段識別和結合的抗原為腫瘤相關抗原；