[發明專利]一種快速區分豬圓環病毒1型、2b型和嵌合型豬圓環病毒C1-233株的引物及其應用

在審

• 申請號: 202210119666.3
• 申請日: 2022-02-09
• 公開（公告）號: CN114317833A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 高崧;潘昊純;郇長超
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 吳波

1.一種快速區分豬圓環病毒1型毒株、2b型0233株和嵌合型豬圓環病毒C1-233株的引物，其特征在于，所述引物的上游引物為5’-TGT CCCAGC TGTAGAAGC TCT-3’，所述引物的下游引物為5’-GCA GTT GAG GAG TAC CATTCC-3’。

2.權利要求1所述引物在制備快速區分豬圓環病毒1型毒株、2b型0233株和嵌合型豬圓環病毒C1-233株產品中的應用。

3.一種快速區分豬圓環病毒1型毒株、2b型0233株和嵌合型豬圓環病毒C1-233株的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：采用權利要求1所述引物對待測物基因進行PCR擴增，利用限制性內切酶Ssp I對PCR擴增產物進行酶切，然后進行瓊脂糖凝膠電泳，豬圓環病毒1型毒株為1759bp單一條帶，豬圓環病毒2b型0233株為659bp、594bp和514bp三條帶，嵌合型豬圓環病毒C1-233株為1098bp和669bp兩條帶。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR的反應體系包括：終濃度為0.4μM的上、下游引物，DNA模板，2×Taq MasterMix和無菌雙蒸水。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述終濃度為0.4μM的上、下游引物，DNA模板，2×Taq Master Mix和無菌雙蒸水的體積比為0.1-1：1-5：12.5：5.5-11.3。

6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR的反應條件包括：95℃預變性5min；95℃變性30s，52-58℃退火30-60s，72℃延伸1min46s-2min，35個循環；72℃延伸5min，12℃保存。

7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述酶切的方法包括如下步驟：將PCR擴增產物與10×Ssp I Buffer、Ssp I和無菌雙蒸水混合，孵育。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述PCR擴增產物與10×Ssp I Buffer和Ssp I的質量體積比為1-2μg：2μL：1-2μL。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述孵育的溫度為37℃。

10.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述孵育的時間為2-3h。