[發明專利]肝細胞癌患者術后復發預測模型的構建方法

在審

• 申請號: 202210109348.9
• 申請日: 2022-01-28
• 公開（公告）號: CN114277155A
• 公開（公告）日: 2022-04-05
• 發明（設計）人: 陳冬波;陳紅松
• 申請（專利權）人: 北京大學人民醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11;G16H50/20;G16H50/30;G16B25/00;G06Q10/04
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 黃爽

本發明提供一種肝細胞癌患者術后復發預測模型的構建方法。本發明系統研究了8個NKG2D配體(MICA、MICB及ULBP1?6)在HCC中的表達和分布，發現MICA、MICB和ULBP4在HCC組織中高表達，ULBP3可能在HCC進展中發揮重要作用。提示在HCC中可以通過靶向MICB構建高親和力的NKG2D?CAR?NK細胞。基于MICA、ULBP3和ULBP5的RFS預測模型可以預測肝切除術后肝癌患者的復發，可能具有潛在的臨床價值。

技術領域

本發明涉及分子生物學和醫學診斷技術領域，具體地說，涉及一種肝細胞癌患者術后復發預測模型的構建方法。

背景技術

肝細胞癌是全球常見的惡性腫瘤之一，其病死率和死亡率依然很高。盡管近年來在肝細胞肝癌治療方面發展迅速，然而，對于這種致死性疾病的預后診斷方法依然較少。目前，手術切除手術憑借其術中低死亡率的特點已經成為治療HCC的最為安全的一種治療手段。然而，高復發率依然是術后死亡的一個主要原因，會導致肝癌患者的總體預后不佳。因此，找到新的標記物用于預測腫瘤的復發，則可以在臨床實踐中指導我們對患者進行危險分層、采取個體化監測并有針對性的進行干預。

NK細胞是固有免疫系統中重要的效應細胞，執行免疫清除和免疫監視功能，是機體抵御入侵的病原體和腫瘤細胞的第一道防線。NK細胞在肝臟內高度富集，占肝內淋巴細胞的30％～50％，是外周血中占比的2～5倍。肝臟內NK細胞的細胞毒性和產生細胞因子的能力均高于外周血NK細胞，而且部分具有獨特的免疫表型和功能特征。NKG2D是一種C型凝集素受體，是NK細胞重要的激活受體，它可識別一系列親和力不同、結構多樣的配體，包括MHC-Ⅰ類分子相關分子A/B(MICA/B)及6種UL16結合蛋白(ULBP1-6)。NKG2DL一般在正常的細胞中不表達，常表達于病毒感染細胞，及肝癌、胰腺癌、結腸癌、肺癌、黑色素瘤、神經母細胞瘤等腫瘤細胞中。這些配體均能與NKG2D結合，激活下游級聯信號轉導，在抗腫瘤免疫應答過程中起重要作用。

已有研究證實NKG2DL在肝癌細胞中表達并與預后相關。2012年Kamimura等研究發現ULBP1主要表達于發育不良結節(dysplastic nodule，DN)、高分化和中度分化HCC的肝癌細胞，而不表達于低分化HCC的癌細胞；且ULBP1表達陰性的HCC患者無復發生存時間明顯短于ULBP1陽性表達的HCC患者。而2021年Cadoux等研究發現ULBP1和其它配體MICA、MICB、ULBP2均在肝癌中高表達，且它們的表達與腫瘤的分級和低分化(low levels ofdifferentiation)呈正相關，MICA、MICB、ULBP1、ULBP2高表達的患者預后差且容易發生早期復發。這提示肝癌中NKG2D配體的表達和患者早期復發之間的關系仍然存在爭議。

發明內容

本發明旨在探討MICA、MICB及ULBP1-6等NKG2D配體在肝細胞癌中的表達，并評估與預后和臨床因素的關系，并進一步基于NKG2D配體構建預測肝細胞癌早期復發的模型。

為了實現本發明目的，第一方面，本發明提供用于預測肝細胞癌患者術后復發的生物標記物，其為肝細胞癌患者體內MICA和/或ULBP3基因的相對表達量；MICA基因表達量與術后復發的可能性呈正相關，ULBP3基因表達量與術后復發的可能性呈負相關。

第二方面，本發明提供檢測MICA、ULBP3和/或ULBP5基因表達量的試劑在制備肝細胞癌患者術后復發的評價試劑中的應用。

優選地，檢測MICA基因表達量的試劑包含如SEQ ID NO:1-2所示的引物，檢測ULBP3基因表達量的試劑包含如SEQ ID NO:3-4所示的引物，檢測ULBP5基因表達量的試劑包含如SEQ ID NO:5-6所示的引物。