[發明專利]一種用于分析高分子糖類化合物定性和定量的方法

有效

• 申請號: 202210108229.1
• 申請日: 2022-01-28
• 公開（公告）號: CN114441684B
• 公開（公告）日: 2023-09-26
• 發明（設計）人: 陳偉;高磊;王奉景;于曉雨;李文菁;王毅飛;張帆
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/14;G01N30/74
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 張曉鵬

本發明涉及一種用于分析高分子糖類化合物定性和定量的方法，所述方法為：1)選用普魯蘭多糖為標準品；2)先經過微孔濾膜進行過濾后利用高效液相色譜和示差折光檢測器進行檢測；3)取不同分子量的標準品進行檢測后得到標準品的色譜圖和保留時間，以對數logMw為縱坐標、色譜峰的保留時間為橫坐標進行回歸分析，分子量標準曲線；4)不同濃度的標準品進行色譜檢測，得到擬合曲線；5)將待測樣品利用步驟2)的方法進行檢測后，得到色譜圖的響應值和保留時間，利用步驟3)的標準曲線和步驟4)的擬合曲線得到HPLC定量曲線計算待測樣品的重均相對分子質量和濃度有利于高分子糖類化合物的定性和定量分析。

技術領域

本發明屬于糖類化合物的分析技術領域，具體涉及一種用于分析高分子糖類化合物定性和定量的方法。

背景技術

公開該背景技術部分的信息僅僅旨在增加對本發明的總體背景的理解，而不必然被視為承認或以任何形式暗示該信息構成已經成為本領域一般技術人員所公知的現有技術。

多糖的藥理活性與其相對分子質量(Mw)及其分布密切相關，高分子糖類化合物由于其分子量大、結構復雜，而且缺少易于檢測的發光基團，相關的定性和定量方法尚未完全建立，限制了人們對其進一步的研究和應用，如何快速準確地鑒別及定性定量分析糖類化合物成為糖類產業化過程中的關鍵問題。

目前，硫酸苯酚法、硫酸蒽酮法等常作為多糖的測定方法，雖然可以較為迅速地進行測定，但其只能測定樣品的總糖含量，無法準確地針對一些特定分子量的高分子糖類化合物進行定量分析。高效液相色譜技術(HPLC)是目前應用比較廣泛的多糖的分子量測定和定量的分析方法，可以對高分子和低分子的多糖化合物進行分離、定性及定量。但目前該方法只能建立對應多糖標準品下的定量曲線，因而只能對有限的和分子量確定或接近標準品的目標化合物進行定量分析，無法對其他未知或更高分子量的糖類化合物進行定量分析。現有的一種方法中，為了較為準確地測定樣品中多糖的含量和相對分子質量分布，通過選用分子量與樣品相近的葡聚糖為標準品，采用面積歸一法計算各組分含量。雖然該方法一定程度上可以實現相近分子量樣品的定量，但是當樣品與標準品分子量差距過大時，用于定量分析是極為不準確的。

發明內容

針對上述現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種用于分析高分子糖類化合物定性和定量的方法。

為了解決以上技術問題，本發明的技術方案為：

一種用于分析高分子糖類化合物定性和定量的方法，所述方法為：

1)選用普魯蘭多糖(Pullulan?KIT)用流動相溶解為標準品溶液，將待測樣品用流動相溶解為樣品溶液；

2)將步驟1)的待測樣品溶液和標準品溶液經過微孔濾膜進行過濾后利用高效液相色譜和示差折光檢測器進行檢測；

3)取不同分子量的標準品溶液利用步驟2)的方法進行檢測后得到標準品的色譜圖和保留時間(RT)，以標準品分子量的對數logMw為縱坐標、色譜峰的保留時間為橫坐標進行回歸分析，得出回歸方程和計算分子量的標準曲線；

4)取不同分子量的標準品進行色譜檢測，得到標準品的色譜圖和響應值(Mv)，根據步驟3)的標準曲線以及不同標準品的濃度，擬合得到不同濃度下的擬合曲線；

5)將待測樣品利用步驟2)的方法進行檢測后，得到色譜圖的響應值(Mv)和保留時間(RT)，利用步驟3)的標準曲線和步驟4)的擬合曲線得到HPLC定量曲線計算待測樣品的重均相對分子質量和濃度。

響應值為色譜圖的Mv，保留時間能夠通過色譜圖的峰對應的橫坐標得到。通過色譜圖得到出現的峰的保留時間，通過步驟3)的分子量標準曲線得到分子量對數值logMw，進而得到分子量。進一步通過步驟4)的擬合曲線，得到HPLC定量曲線，通過分子量和響應值，得到對應的濃度。所以能夠對高分子糖類化合物進行定性和定量。