[發明專利]一種酶法聯合微生物發酵制備大豆低聚肽的方法及其應用

有效

• 申請號: 202210106630.1
• 申請日: 2022-01-28
• 公開（公告）號: CN114181990B
• 公開（公告）日: 2023-09-05
• 發明（設計）人: 黃君陽;李滿園
• 申請（專利權）人: 廈門元之道生物科技有限公司
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C12P39/00;C07K1/30;C07K1/34;C07K1/36;A23L27/30;A23L29/00;A23L29/30;A23L33/18;A23P10/28;C12R1/125;C12R1/25;C12R1/645;C12R1/02
• 代理公司: 廈門市天富勤知識產權代理事務所(普通合伙) 35244
• 代理人: 唐紹烈

本公開提供了一種酶法聯合微生物發酵制備大豆低聚肽的方法，包括大豆分離蛋白預處理、復合酶酶解、微生物發酵、分離純化的等步驟。本公開還提供了一種大豆低聚肽的應用，即可用于制備大豆低聚肽咀嚼片。

技術領域

本公開涉及食品加工的技術領域，尤其涉及一種酶法聯合微生物發酵制備大豆低聚肽的方法及其應用。

背景技術

大豆蛋白營養價值很高，有豐富的優質蛋白，可以提供充足的人體所需的8種必需氨基酸、多種維生素和礦物質等。但大豆蛋白質分子結構復雜，相對分子量較大，溶解性差，消化率和生物效價不及牛乳等動物蛋白質。大豆肽是由大豆蛋白經過蛋白酶作用或者微生物技術處理后，再經過分離、精制等特殊處理而得到的低聚肽混合物，還包括一些游離氨基酸、水、灰分和少量的糖分等。大豆肽一般是由3～6個氨基酸組成的低分子量肽，蛋白質含量為85％左右，氨基酸組成與大豆蛋白質大體相同，必需氨基酸含量豐富且平衡。大豆肽的平均分子量小于1000道爾頓，主要出峰位置在分子量為300～700道爾頓。大豆肽具有良好的生物活性，如:促進脂肪代謝、抗氧化、降血脂和抗血栓形成等；同時具有良好的營養特征和加工性能，大豆肽能促進微生物的生長發育和代謝，在醋、醬油、奶酪、發酵食品中添加大豆肽可以顯著提高產品的品質和營養價值，并增強產品的口感風味等，大豆肽作為新一代的超級蛋白營養素和多功能生理活性物質，具有廣闊的應用及市場前景。

現有技術采用酶法或微生物發酵法制備大豆低聚肽都存在一些不足，采用單獨酶法制備大豆低聚肽工藝存在酶解周期長、使用化學品多、產生苦味大、溶解性能差、產品得率低，而且需要投資的膜分離設備價格昂貴，處理效率低，維護成本高。而微生物發酵法存在發酵周期長、發酵條件比較嚴苛、菌株效率低、產能局限、成本高等問題。

發明內容

針對上述傳統方法制備大豆低聚肽的問題，本公開提供了一種酶法聯合微生物發酵制備大豆低聚肽的方法，包括：

步驟一、大豆分離蛋白預處理：以大豆分離蛋白粉為原料，大豆分離蛋白按1：8～1：10(w/v)料液比(kg：L)加入純化水，常溫下剪切30～60min，剪切速度600～1000r/min；得到蛋白勻漿液；

步驟二、復合酶酶解：在所述蛋白勻漿液中滴加堿液調節體系pH至8.0～8.5,通過維持pH＝8.0～8.5條件下，不斷地富集含羧基基團的低聚肽，正向提高大豆分離蛋白的水解度，采用復合酶A和復合酶B梯度酶解：先添加復合酶A，通過控制體系pH維持在8.0～8.5，酶解溫度50～60℃，酶解2～3小時；再加入復合酶B，酶解1～2小時，高溫滅菌，再降溫至30～38℃；得到復合酶酶解液；

步驟三、微生物發酵：控制發酵溫度30～38℃；在復合酶酶解液中加入碳源以及無機鹽氯化銨緩沖體系，再加入活性干酵母發酵發酵，活性干酵母添加質量按發酵液體積的0.05％～0.4％(w/v)，發酵3～5h，控制酒精度1～3(％Vol)；再加入東方醋酸菌發酵，東方醋酸菌添加質量按發酵液體積的0.1％～1.0％(w/v)，發酵1～3h，控制產乙酸5～20g/L；再加入枯草芽孢桿菌及植物乳酸菌發酵，枯草芽孢桿菌和植物乳酸菌添加質量按發酵液體積的0.1％～0.8％(w/v)，發酵4～8h；東方醋酸菌產酸富集，待發酵體系的pH＝4.4～4.8，終止發酵；

步驟四、分離純化：發酵結束后滅菌，通過東方醋酸菌代謝產酸的富集讓分散型的蛋白變性沉淀，離心機分離2000～4000r/min，得到發酵清液和固體渣，所述固體渣通過高溫滅菌，凍干后，得到大豆發酵粉；所述發酵清液通過活性炭脫色脫味、板框過濾、納濾脫鹽濃縮、UHT殺菌、噴霧干燥工序，得到大豆低聚肽。

作為實施例的優選方式，所述步驟二中，所述復合酶A添加量為大豆分離蛋白粉質量的0.8％～2.0％(w/w)，所述復合酶B添加量為大豆分離蛋白粉質量的0.3％～1.0％(w/w)。