[發明專利]一種檢測雌二醇含量的檢測卡、制備方法、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202210100778.4
• 申請日: 2022-01-27
• 公開（公告）號: CN116559470A
• 公開（公告）日: 2023-08-08
• 發明（設計）人: 劉雙;蔣析文;齊文闖;潘秀華;陳澤壯
• 申請（專利權）人: 廣州達安基因股份有限公司
• 主分類號: G01N33/74
• 分類號: G01N33/74;G01N33/558;G01N33/543;G01N21/64
• 代理公司: 深圳市世聯合知識產權代理有限公司 44385
• 代理人: 姜妍

1.一種定量檢測雌二醇含量的檢測卡的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

樣品墊的制備：首先，將玻璃纖維膜置于樣品墊處理液中浸泡；其次，浸泡處理后的樣品墊干燥處理，制得樣品墊；完后密封存儲備用；

結合墊的制備：首先，制備標記抗體溶液，包括檢測線標記抗體溶液和質控線標記抗體溶液；其次，將檢測線標記抗體溶液和質控線標記抗體溶液按照體積比1:1混合均勻；最后，將檢測線標記抗體溶液和質控線標記抗體溶液混合均勻設置在玻璃纖維膜上，制得結合墊；

反應板的制備與包被：首先，將硝酸纖維素膜粘貼在長條狀構造的PVC底板的以備表面；其次，分別配制檢測線包被工作液和質控線包被工作液；最后，用所述檢測線包被工作液和質控線包被工作液在所述硝酸纖維素膜上分別劃檢測線和質控線，所述檢測線和質控線間隔平行；

檢測卡組裝：首先，將樣品墊、結合墊、吸收墊粘貼在PVC底板上，所述樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜、結合墊依次沿PVC底板的長度方向設置，且所述硝酸纖維素膜的兩端分別結合墊和結合墊一端層疊接觸，所述結合墊另一端與所述樣品墊的一端層疊接觸，制得樣品檢測卡；其次，根據需要，對所述樣品檢測卡進行裁剪，獲得相應規格尺寸的檢測卡；最后，將所述檢測卡適配置于一硬質材質的卡殼中，制得所述檢測卡，并配置干燥劑鋁箔或錫箔密封；且所述卡殼設有加樣孔和檢測觀察孔，所述加樣孔與所述樣品墊適配對應設置，所述檢測觀察孔能有效觀察到所述硝酸纖維素膜上的檢測線和質控線。

2.根據權利要求1所述的檢測卡的制備方法，其特征在于，所述樣品墊的制備步驟中，所述樣品墊處理液包括：每100mL稀釋液中含有1gPVP、1g氯化鈉及1g吐溫。

3.根據權利要求1所述的檢測卡的制備方法，其特征在于，所述樣品墊的制備步驟中，所述浸泡處理后的樣品墊干燥處理條件為：干燥溫度為18～26℃，相對濕度≤30％，干燥時間為16～24小時。

4.根據權利要求1所述的檢測卡的制備方法，其特征在于，所述結合墊的制備步驟中，所述檢測線標記抗體溶液的配制步驟如下：

往離心管中加入標記緩沖液MES，并加入熒光微球標記E2-L抗體，混勻；

往上述離心管中加入標記活化液，密封離心混勻；

離心結束后，去除離心管中的上清液，再往離心管中加入標記緩沖液MES，超聲處理，打散沉淀；

往離心管中加入熒光微球標記E2-L抗體，再次密封離心混勻；

離心結束后，再次去除離心管中的上清液，留存沉淀，超聲處理，打散沉淀；

沉淀打散均勻后，加入標記保存液，制得所述檢測線標記抗體溶液。

5.根據權利要求1所述的檢測卡的制備方法，其特征在于，所述結合墊的制備步驟中，所述質控線標記抗體溶液的配制步驟如下：

往離心管中加入標記緩沖液MES，并加入熒光微球標記羊抗雞IgY抗體，混勻，制得熒光微球；

往上述離心管中加入標記活化液，密封離心混勻；

離心結束后，去除離心管中的上清液，再往離心管中加入標記緩沖液MES，超聲處理，打散沉淀；

往離心管中加入熒光微球標記羊抗雞IgY抗體，再次密封離心混勻；

離心結束后，再次去除離心管中的上清液，留存沉淀，超聲處理，打散沉淀；

沉淀打散均勻后，加入標記保存液，制得所述質控線標記抗體溶液。

6.根據權利要求1所述的檢測卡的制備方法，其特征在于，所述反應板的制備與包被步驟中，所述檢測線包被工作液的制備步驟如下：

用所述檢測線抗體包被稀釋液將E2-C抗體稀釋至1.0mg/mL，即得到檢測線包被工作液；

所述檢測線包被工作液配制完成后的溶液再在2～8℃保存，保存時間≤72小時。

7.根據權利要求1所述的檢測卡的制備方法，其特征在于，所述反應板的制備與包被步驟中，所述質控線包被工作液的制備步驟如下：

用所述質控線抗體包被稀釋液將雞IgY抗體稀釋至1.0mg/mL，即得到檢測線包被工作液；

所述質控線包被工作液配制完成后的溶液再在2～8℃保存，保存時間≤72小時。