[發明專利]一種吲哚生物堿類化合物及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202210098568.6
• 申請日: 2022-01-27
• 公開（公告）號: CN114409661B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發明（設計）人: 楊鳳仙;代家猛;孔維松;米其利;王晉;張建鐸;劉欣;楊光宇;汪偉光;周敏;胡秋芬
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: C07D487/06
• 分類號: C07D487/06;C12P17/18;C12N1/14;A01N43/90;A01P3/00;C12R1/66
• 代理公司: 北京市領專知識產權代理有限公司 11590
• 代理人: 陳有業;任永利

1.一種吲哚生物堿類化合物，其特征在于，其具有下述結構：

所述吲哚生物堿類化合物分子式為：C₁₇H₁₆N₂O₃，化合物命名為花斑曲霉生物堿-H。

2.根據權利要求1所述的吲哚生物堿類化合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)浸膏提取：對從煙草中分離出的花斑曲霉YATS1111進行固體發酵，其發酵產物用90wt％-99wt％的乙醇超聲提取并過濾再濃縮，然后加入乙酸乙酯與3wt％酒石酸溶液體積比為1:1-1:2的混合液混合均勻，靜置分層后分出水相；水相再用Na₂CO₃調節pH至9.0，并用乙酸乙酯再次萃取，乙酸乙酯相減壓濃縮成浸膏；所述花斑曲霉菌株YATS1111保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號是CGMCC No.19910；

(2)硅膠柱層析：將步驟(1)得到的浸膏用200-300目硅膠干法裝柱；所述硅膠與所述浸膏的質量比為2-5；以體積配比分別為10:0、9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-甲醇溶液進行梯度洗脫，合并相同極性的部分，收集各部分洗脫液并濃縮；收集用體積比為9:1的氯仿-甲醇溶液洗脫時得到的洗脫液，稱為第一洗脫液；將上述洗脫液濃縮后再次用硅膠層析柱繼續分離，用體積配比依次為9:1、8:2、7:3、6:4、5:5的氯仿-丙酮溶液進行梯度洗脫，收集其中用體積比為8:2的氯仿-丙酮溶液洗脫時得到的洗脫液，稱為第二洗脫液；

(3)高效液相色譜分離：將步驟(2)得到的第二洗脫液濃縮，更換溶劑為甲醇，通入高效液相色譜進行分離純化，所述高效液相色譜法分離純化是采用21.2mm×250mm，5μm的ZorbaxPrepHT GF色譜柱，流速為20mL/min，流動相為55wt％的甲醇水溶液，紫外檢測器檢測波長為402nm；每次進樣200μL，收集每次進樣后色譜峰保留時間為26.4min時所對應的洗脫液，稱為第三洗脫液，將該第三洗脫液脫除溶劑后即得所述的吲哚生物堿類化合物粗品；

(4)將步驟(3)的生物堿化合物粗品再次用純甲醇溶解，以甲醇為流動相進行葡聚糖凝膠柱層析分離，即可得到所述的生物堿類化合物純品；

步驟(1)花斑曲霉YATS1111進行固體發酵的步驟為：將分離得到的花斑曲霉菌種在室溫下接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基上，25～30℃培養7～10天，再接種在50～500mL的三角瓶中，置于25～30℃下震蕩培養5～10天得到液體發酵種；每個三角瓶含10～100mL馬鈴薯葡萄糖培養基；

將液體發酵種進行規模化發酵，規模化發酵是在100～1000個100～500mL的馮巴赫瓶中進行，每個瓶含有400～600g大米和60～400mL營養液；營養液的組成為：葡萄糖5％、蛋白胨0.15％、四水合硝酸鈣0.1％、硝酸鉀0.6％、磷酸二氫銨0.2％、七水合硫酸鎂0.4％、復合氨基酸1％，其余量為水；營養液pH值為6.8。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)中乙醇的濃度為95wt％。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述浸膏在經硅膠柱層析粗分前，用甲醇溶解后用重量比1.5～2.5倍的80～120目硅膠拌樣。

5.根據權利要求1所述吲哚生物堿類化合物在制備抗煙草黑脛病生物農藥制劑中的應用。