[發明專利]一種提高冷凍卵母細胞體外培育質量的培養液及其應用有效
| 申請號： | 202210097053.4 | 申請日： | 2022-01-26 |
| 公開（公告）號： | CN114350600B | 公開（公告）日： | 2023-08-18 |
| 發明（設計）人： | 傅祥偉;李俊;杜幸柱;顓清芮;侯云鵬 | 申請（專利權）人： | 中國農業大學;河北醫科大學第一醫院 |
| 主分類號： | C12N5/075 | 分類號： | C12N5/075;A01N1/02 |
| 代理公司： | 北京專贏專利代理有限公司 11797 | 代理人： | 劉偉 |
| 地址： | 100193 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 提高 冷凍 細胞 體外 培育 質量 培養液 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.一種提高冷凍卵母細胞體外培育質量的培養液，其特征在于，在M16培養液中添加伴刀豆球蛋白A，通過調節皮質張力恢復冷凍卵母細胞機械特性從而提高冷凍卵母細胞體外培育質量，所述伴刀豆球蛋白A的添加濃度為10μg/ml。
2.一種利用權利要求1所述培養液提高冷凍卵母細胞體外培育質量的方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1、采集GV期卵母細胞并置于M2液滴中備用；
S2、將卵母細胞轉移至平衡液中30秒，隨后轉移至玻璃化冷凍液中20-30秒，然后迅速將卵母細胞置于載桿前端，投入液氮；
S3、解凍時，將S2所述載桿迅速從液氮中取出，置于含0.5M蔗糖的PBS中作用5min，然后用M2液清洗三遍后備用；
S4、將S3獲得的卵母細胞放入所述提高冷凍卵母細胞體外培育質量的培養液中，覆蓋上石蠟油于培養箱中進行體外成熟培養。
3.根據權利要求2所述提高冷凍卵母細胞體外培育質量的方法，其特征在于，所述平衡液為含10%?DMSO和10%?EG的PBS液。
4.根據權利要求2所述提高冷凍卵母細胞體外培育質量的方法，其特征在于，所述玻璃化冷凍液為含15%?EG、15%DMSO、0.5M蔗糖、30%Ficoll的PBS液。
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