[發明專利]一種改變泰萬菌素發酵過程的溶氧以降低4”-氧-異戊酰泰樂菌素組分方法

有效

• 申請號: 202210092868.3
• 申請日: 2022-01-26
• 公開（公告）號: CN114606282B
• 公開（公告）日: 2023-08-25
• 發明（設計）人: 時鵬飛;黃科學;高嶺;楊耀剛
• 申請（專利權）人: 齊魯制藥（內蒙古）有限公司;時鵬飛
• 主分類號: C12P19/62
• 分類號: C12P19/62;C12R1/465
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 陳桂玲

本發明涉及一種改變泰萬菌素發酵過程的溶氧以降低4”?氧?異戊酰泰樂菌素組分方法.在以耐熱鏈霉菌為生產菌株在發酵罐中進行泰萬菌素的發酵生產，在發酵初期調控pH，然后補入泰樂菌素干粉和L?亮氨酸，再補加葡萄糖溶液直至發酵完成；整個發酵過程中控制不同發酵時間的溶氧量，0～35h內溶氧量在50％以上，35～70h內溶氧量為20～30％，70h至放罐期間溶氧量在70％以上。本發明改變了泰樂菌素發酵過程的空氣分布形式，控制了不同發酵時間段的溶氧量，解決了泰萬菌素因單獨攪拌機提高壓力造成菌絲老化自溶和泡沫大的問題，有效地降低了發酵液中4”?氧?異戊酰泰樂菌素組分含量，進而提高了發酵液中泰萬菌素的含量，實現發酵液中泰萬菌素組分比例高于84％。

技術領域

本發明涉及一種改變泰萬菌素發酵過程的溶氧以降低4”-氧-異戊酰泰樂菌素組分方法，屬于發酵技術領域。

背景技術

泰萬菌素，又名乙酰異戊酰泰樂菌素(AIV)、3-O-乙酰基-4〞-O-異戊酰基酒石酸鹽，其結構如式I所示，是一種禽畜專用的大環內酯類抗生素。作為一種全新的大環內酯類抗生素，泰萬菌素克服了其它大環內酯類藥物的不足，具有高效、低毒、低殘留、不會產生大環內酯類藥物間的耐藥性等優點，在市場上廣受歡迎。

現有技術中主要通過添加泰樂菌素和不同的酰基供體的方法己經生產了多種泰樂菌素的衍生物，其中就包括泰樂菌素的第三代升級產品乙酰異戊酰泰樂菌素，即泰萬菌素。通過對泰樂菌素的3'-OH和4'-OH位置進行選擇性地酰化修飾，合成乙酰異戊酰泰樂菌素基因目前已經闡明包括在泰樂菌素的基礎上負責酰化功能的是二個基因acyA和acyB，其中acyB包含?Bl和B2，其中，基因acyA主要負責乙酰基化功能，而基因acyB主要負責異戊酰基化功能，?B1基因為負責泰樂菌素4-OH上的異戊酰化基因，B2為激活B1的正調控基因。其具體的生物合成通路如下所示：

AIV的發酵生物合成通路

泰萬菌素發酵液組分復雜，3-O-乙酰基-4〞-O-異戊酰基泰樂菌素(T2i5)為主要成分，但還含有3-氧-乙酰泰樂菌素(T20)、4”-氧-異戊酰泰樂菌素(T0i5)、3-氧-乙酰-4”-氧-異戊酰雷洛菌素(R2i5)等中間產物，乙酰異戊酰泰樂菌素相關物質如下表所示。

目前主要的泰萬菌素發酵方法為：發酵罐接種后，pH自然上升到7.50后持續補入酸，控制離線在7.45～7.55之間，當發酵發酵時間在35～45h期間發酵液pH會自然代謝下降至6.9?以下，然后流加補入底物泰樂菌素干粉和L-亮氨酸，再補加葡萄糖溶液使得pH在6.95～7.25?之間，直至發酵完成。現有技術中發酵罐攪拌槳組合一般為三層攪拌，其中底層采用拋物線型攪拌器，中層為直葉圓盤攪拌器，上層采用軸流式攪拌槳。雖然該組合對于能耗、氣-液分散效果較高，但不利于發酵的液面控制，當液面表層與上層攪拌接觸后容易產生較大泡沫，從進而影響補料和放罐體積。同時現有發酵工藝僅對泰萬菌素代謝過程中的T20和T2i5的液相結果進行分析，進而控制下一步的補料速率，但是對于泰萬菌素而言，菌絲易受到攪拌等機械應力而斷裂產生泡沫，從而影響次級代謝，故體積控制在體積85％以下(上層攪拌附近)，隨后期發酵液面與上層攪拌接觸會加劇發酵液翻滾，造成泡沫快速增大、發酵狀態不可控，導致4”-氧-異戊酰泰樂菌素組分含量過高。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種改變泰萬菌素發酵過程的溶氧以降低4”-氧-?異戊酰泰樂菌素組分方法。

本發明的技術方案如下：

一種改變泰萬菌素發酵過程的溶氧以降低4”-氧-異戊酰泰樂菌素組分方法，在以耐熱鏈霉菌為生產菌株在發酵罐中進行泰萬菌素的發酵生產，在發酵初期調控發酵液pH至7.00～7.50，然后流加補入底物泰樂菌素干粉和L-亮氨酸，再補加葡萄糖溶液使得發酵液pH?在6.95～7.25之間，直至發酵完成；