[發(fā)明專利]一種CA-TM融合蛋白及其在檢測梅迪-維斯納病毒中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202210077825.8
• 申請日: 2022-01-24
• 公開（公告）號: CN114409806B
• 公開（公告）日: 2023-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉淑英;齊景偉;陳思旭
• 申請（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;G01N33/569;G01N33/543;G01N33/58;G01N33/535
• 代理公司: 北京正理專利代理有限公司 11257
• 代理人: 趙曉丹

本發(fā)明公開一種CA?TM融合蛋白及其在檢測梅迪?維斯納病毒中的應(yīng)用。本發(fā)明首先公開了氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的CA?TM融合蛋白。本發(fā)明進一步公開了包括以上述CA?TM融合蛋白作為包被抗原的酶標板的梅迪?維斯納病毒抗體間接ELISA檢測試劑盒及檢測方法。本發(fā)明基于CA?TM融合蛋白建立了梅迪?維斯納病毒抗體間接ELISA檢測方法用于檢測梅迪?維斯納病毒抗體水平，具有特異性強、靈敏度高、重復(fù)性好和操作方便等特點，臨床檢測與現(xiàn)有國際商品化試劑盒符合率較高，可實現(xiàn)大規(guī)模檢測，為梅迪?維斯納病血清學(xué)檢測及流行病學(xué)調(diào)查提供有效的手段，具有較為廣闊的市場前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種CA-TM融合蛋白及其在檢測梅迪-維斯納病毒中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

梅迪-維斯納病(Maedi-Visna?Disease,MVD)是由梅迪-維斯納病毒(Madedi-Visna?Virus,MVV)引起綿羊緩慢性、接觸性、進行性的炎性疾病。MVV基因組長度在9200個核苷酸之間，主要由3個逆轉(zhuǎn)錄病毒共同的主要基因(gag、pol和env)和調(diào)控基因(vif、tat和rev)組成。編碼基因分別對應(yīng)結(jié)構(gòu)蛋白(Gag、Pol和Env)和調(diào)節(jié)蛋白(Vif、Tat和Rev)。gag編碼保護DNA的內(nèi)部結(jié)構(gòu)蛋白，其中最大的是衣殼蛋白(Capsid?protein,CA，也稱p25)，它刺激宿主產(chǎn)生抗體，常用于ELISA檢測方法。env編碼以下兩種插入囊膜的蛋白質(zhì)：表面糖蛋白(Surface?protein,SU，也稱Gp135)和跨膜糖蛋白(Transmembrane?protein,TM，也稱Gp46)。其中，SU刺激機體產(chǎn)生抗體，但其具有高度可變性，而TM是一種相對保守得多的蛋白質(zhì)，它是不同地方國家進行MVD?ELISA檢測的優(yōu)先抗原選擇。目前為止，沒有對MVD有效治療的方法，對受到MVV感染的病畜只能進行隔離、撲殺。MVV具有較長的潛伏期，往往數(shù)年才能在羊群中發(fā)現(xiàn)病畜，在這段時間中，已經(jīng)發(fā)病的病畜在羊群中仍在通過排出呼吸道分泌物以及密切接觸持續(xù)傳播病毒。正因為以上這些因素，造成了養(yǎng)羊業(yè)不同程度的經(jīng)濟損失，世界動物衛(wèi)生組織(Office?International?Des?Epizooities，OIE)將MVD列為B類疫病，中國也將其列為Ⅱ類動物疫病。目前只能采用足夠的控制程序用來限制病毒的傳播或根除疾病。如何能根除MVD在很大程度上取決于如何準確、及時的在羊群中找到發(fā)病羊，所以對于MVV的檢測手段的使用以及更新就顯得尤為重要。

因此，建立一種敏感性高、特異性強的檢測綿羊MVV的試劑盒對于MVD的防控、監(jiān)測及公共衛(wèi)生都具有重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個目的在于提供一種CA-TM融合蛋白，用于快速檢測梅迪-維斯納病毒抗體水平，以判定綿羊梅迪-維斯納病毒感染情況。

本發(fā)明的第二個目的在于提供上述CA-TM融合蛋白在檢測梅迪-維斯納病毒中的應(yīng)用和/或在檢測梅迪-維斯納病毒抗體中的應(yīng)用。

本發(fā)明的第三個目的在于提供一種梅迪-維斯納病毒抗體間接ELISA檢測試劑盒。

本發(fā)明的第四個目的在于提供一種梅迪-維斯納病毒抗體間接ELISA檢測方法。

為達到上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

第一方面，本發(fā)明提供了一種CA-TM融合蛋白，所述CA-TM融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

本發(fā)明CA-TM融合蛋包含了綿羊梅迪-維斯納病毒中結(jié)構(gòu)蛋白(Gag)主要刺激機體產(chǎn)生抗體的衣殼蛋白(CA，也稱p25)及囊膜蛋白(Env)中較為保守的跨膜蛋白(TM，也稱Gp46)。