[發明專利]一種與花生乙烯不敏感以及耐鹽相關性狀緊密連鎖的分子標記及應用

有效

• 申請號: 202210077259.0
• 申請日: 2022-01-24
• 公開（公告）號: CN114381547B
• 公開（公告）日: 2023-05-02
• 發明（設計）人: 唐艷艷;李鑫;胡暢麗;周文杰;孫明明;喬利仙;朱虹;隋炯明;王晶珊;劉文平
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04
• 代理公司: 山東三邦知識產權代理事務所(普通合伙) 37308
• 代理人: 牛繼梅;高洋

1.一種與花生乙烯不敏感以及耐鹽相關性狀緊密連鎖的分子標記，其特征在于，所述分子標記為InDel標記Arahy01063和/或Arahy01102；

其中，在乙烯敏感且不耐鹽的花生中Arahy01063的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示，在乙烯不敏感且耐鹽的花生中Arahy01063的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；

在乙烯不敏感且耐鹽的花生中Arahy01102的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示，在乙烯敏感且不耐鹽的花生中Arahy01102的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示。

2.權利要求1所述分子標記在花生乙烯不敏感以及耐鹽性狀篩選中的應用。

3.一種篩選花生乙烯不敏感以及耐鹽性狀的方法，其特征在于，步驟如下：

提取待篩選花生的基因組DNA作為模板，采用引物對PCR擴增權利要求1所述的Arahy01063和/或Arahy01102分子標記，檢測擴增產物；若Arahy01063標記的PCR擴增產物出現單一的163bp大小的特征條帶，則判定待測花生材料為乙烯敏感不耐鹽，若出現一條179bp大小的特征條帶或出現163bp和179bp大小的兩條特征條帶，則判定待測花生材料為乙烯不敏感且耐鹽；

若Arahy01102標記的PCR擴增產物出現182bp大小的特征條帶，則判定待測花生材料為乙烯敏感不耐鹽；若出現一條171bp大小的特征條帶或出現171bp和182bp大小的兩條特征條帶，則判定待測花生材料為乙烯不敏感且耐鹽。

4.根據權利要求3所述篩選花生乙烯不敏感以及耐鹽性狀的方法，其特征在于，擴增InDel標記Arahy01063的引物序列為：

Arahy01063-F:?5’-AAGCACAGAATATGGGTGGA-3’；

Arahy01063-R:?5’-CACTTCGTCCTTTGCATTCT-3’；

擴增InDel標記Arahy01102的引物序列為：

Arahy01102-F:?5’-GAGTGATGTAGGGATTGTTGAAG-3’；

Arahy01102-R:?5’-TGAAATCACAGAAATACACACAAA-3’。

5.根據權利要求3所述篩選花生乙烯不敏感以及耐鹽性狀的方法，其特征在于，

所述擴增Arahy01063時PCR的反應程序為：預變性95℃?4min；94℃?30s，58℃?30s，72℃?25s，35個循環；72℃延伸5min；

所述擴增Arahy01102時PCR的反應程序為：預變性95℃?4min；94℃?30s，57℃?30s，72℃?25s，35個循環；72℃延伸5min。

6.權利要求3-5任一項所述篩選花生乙烯不敏感以及耐鹽性狀的方法在花生乙烯不敏感且耐鹽品種選育中的應用。

7.一種花生乙烯不敏感且耐鹽品種選育的方法，其特征在于，在育種過程中采用權利要求1中所述的Arahy01063和/或Arahy01102分子標記來鑒定真假雜交種或篩選乙烯不敏感且耐鹽的花生品種。

8.根據權利要求7所述花生乙烯不敏感且耐鹽品種選育的方法，其特征在于，具體步驟如下，

以乙烯敏感且不耐鹽和乙烯不敏感且耐鹽的花生品種作為親本進行雜交，采用Arahy01063和/或Arahy01102分子標記來鑒定真假雜交種；篩選的真雜交種與乙烯敏感且不耐鹽的親本連續進行4次回交，每次回交后采用Arahy01063和/或Arahy01102分子標記來篩選具有乙烯不敏感且耐鹽性狀的子代，最終得到的子代再進行4次自交，每次自交后篩選綜合性狀良好的單株，并輔助采用Arahy01063和/或Arahy01102分子標記來篩選具有乙烯不敏感且耐鹽性狀的子代；最終獲得的株系用于進一步擴繁材料。