[發明專利]多種呼吸道病毒核酸質譜檢測的引物組合、試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 202210074260.8
• 申請日: 2022-01-21
• 公開（公告）號: CN114350857A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 翟志向;周曉光;宋合興;李運濤
• 申請（專利權）人: 生物島實驗室;廣東默迪優譜生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京智信四方知識產權代理有限公司 11519
• 代理人: 葛啟宏

本發明公開了多種呼吸道病毒核酸質譜檢測的引物組合、試劑盒及檢測方法，涉及分子生物學檢測技術領域。其中，包括48條擴增引物和24條質量探針延伸引物，通過多重PCR技術與MALDI?TOF技術聯用，能夠實現對多種呼吸道病毒的分型鑒定。檢測通量高，更適合于大規模的病原體篩查。

技術領域

本發明涉及分子生物學檢測技術領域。更具體地，涉及一種多種呼吸道病毒核酸質譜檢測的引物組合、試劑盒及檢測方法。

背景技術

能夠引起人類呼吸道感染的病原體種類多樣，病毒是一個重要致病因素，約有80％的呼吸道感染由呼吸道病毒引起的。這一系列病毒種類繁多，其中最常見，最具有代表性的包括：正黏病毒科(Orthomyxoviridae)的流感病毒(influenzaviruses，IFVs)，副黏病毒科(Paramyxoviridae)的呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)，副流感病毒(parainfluenzaviruses，PIVs)，人偏肺病毒(humanmetapneumovims，HMPV)，小RNA病毒科(Picornaviridae)的人鼻病毒(huamnrhinoviruses，HRVs)，冠狀病毒科(Coronaviridae)的人冠狀病毒(human coronaviruses，HCoVs)，腺病毒科(Adenoviridae)的腺病毒(adenoviruses，ADVs)，以及細小病毒科(Parvoviridae)的人博卡病毒(humanbocavirus，HBOVs)。雖然呼吸道病毒的種類繁多，但其感染有著類似的特點。首先，呼吸道病毒的傳染性都很強，非常容易在人群聚集的場所，如學校、醫院傳播。其次，呼吸道病毒感染引起的癥狀不特異，大多呈現為上呼吸道感染的癥狀，如普通感冒、咽喉炎等。第三，人群對于呼吸道病原體普遍易感，病毒變異速度快，由疫苗獲得的免疫力并非長久有效，呼吸道感染容易反復發生。尤其2019新型冠狀病毒傳染性強，傳播速度快，特別是免疫力低下者，如老年人，免疫抑制，基礎病患者，有時更容易形成繼發感染，對肺部及其他器官造成重大損傷，發展成重癥，甚至危及生命。

對呼吸道病毒進行核酸檢測，目前的主要方法是熒光定量RT-PCR方法。但是由于熒光通道的限制，一次只能檢測1-2種病毒，而且每次的樣本檢測通量低，不利于臨床快速準確大規模的進行病例篩查；NGS高通量測序也是檢測病毒的一種重要技術，通過全測序可以實現病毒及亞型的準確鑒定，但是實驗操作復雜，整體流程時間長，樣本檢測成本升高。因此對于呼吸道病原體的檢測，必須要綜合考慮檢測重數與檢測通量。

發明內容

本發明的一個目的在于提供一種用于多種呼吸道病毒核酸質譜檢測的引物組合及包含這些引物組合的檢測試劑盒，提高對呼吸道病毒的篩查診斷能力。

本發明的另一個目的在于提供一種利用上述試劑盒進行多種呼吸道病毒核酸質譜檢測的方法。該方法使得呼吸道病毒檢測特異性強，靈敏度高。

為達到上述目的，本發明采用下述技術方案：

第一方面，本發明提供一種用于多種呼吸道病毒核酸質譜檢測的引物組合，包括48條擴增引物和24條質量探針延伸引物，其中，擴增引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1-48所示，具體見表1；質量探針延伸引物的核苷酸序列如SEQ ID No.49-72所示，具體見表2。

表1擴增引物序列

表2質量探針延伸(MPE)引物序列