[發明專利]用于檢測腫瘤微小核酸標志物的表面增強拉曼散射檢測試劑盒及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 202210072000.7
• 申請日: 2022-01-21
• 公開（公告）號: CN114410786A
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 宋春元;汪聯輝;張晶晶
• 申請（專利權）人: 南京郵電大學
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6837;C12Q1/6806;C12N15/11
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹翠珍

本發明公開了一種用于非疾病診斷目的的腫瘤微小核酸標志物檢測的表面增強拉曼散射檢測試劑盒及其制備方法與應用。該試劑盒包括SERS檢測芯片，第一、二試劑。SERS檢測芯片為表面修飾有發夾型DNA單鏈H1的銀納米棒陣列基片，第一試劑為發夾型DNA單鏈H2，第二試劑為SERS探針，在SERS檢測芯片上同時加入第一、二試劑后，第二試劑上的探針單鏈P與H1?H2雙鏈的粘性末端雜交，將SERS探針捕獲至SERS檢測芯片上（核酸探針的堿基序列可調），通過測試SERS檢測芯片上SERS探針的拉曼信號，實現對于胃癌微小核酸標志物的檢測，并且可實現在血清等復雜環境中多種核酸生物標志物的一體化檢測，有效提升檢測的特異性與準確性。

技術領域

本發明屬于功能納米材料和生物檢測領域，具體涉及一種用于腫瘤微小核酸標志物檢測的表面增強拉曼散射(SERS)檢測試劑盒及其制備方法與應用。

背景技術

近年來，我國腫瘤的發病率呈逐年上升和年輕化趨勢，是僅次于心腦血管疾病的第二段致使疾病。腫瘤通常起病隱匿，早發現、早診斷、早治療是提高存活率的重要措施。因此，迫切需要在檢測技術和方法學上取得突破。以胃癌為例，胃癌是全世界范圍內發病率最高的癌癥之一，嚴重威脅著公眾的生命健康。據報道，胃癌是全球第四大最常見的癌癥，也是全球癌癥相關死亡的第三大常見原因。目前，內鏡活檢仍是胃癌臨床診斷的金標準。然而，作為一種侵入性方法，它給患者造成了很大的痛苦，其診斷的準確性依賴于內科醫生的技能和經驗。腫瘤分子診斷是指以核酸或蛋白為核心的分子生物學診斷技術，是進行腫瘤早期診斷的重要方法。通過檢測與腫瘤發生相關的生物大分子，進行腫瘤發生的預測、診斷。腫瘤標志物是指由惡性腫瘤產生或由腫瘤刺激宿主細胞產生，可反映惡性腫瘤的發生、發展及對抗腫瘤治療反應的物質。其在細胞中表達水平的高低或在體液中含量的變化與腫瘤的發生、發展與轉化密切相關。腫瘤標志物是腫瘤分子診斷重要的檢測對象之一。MicroRNAs(miRNAs)是由19-25個核苷酸組成的非編碼小RNA分子，通過抑制和/或降解mRNA來調控基因表達。研究表明，miRNA表達的失調往往與疾病的發生發展密切相關。此外，越來越多的證據表明miRNA可以作為包括胃癌在內的各種腫瘤類型的生物標志物。

傳統的miRNA檢測方法包括Northern印跡法、微陣列和實時聚合酶鏈反應(RT-PCR)，其中以PCR為基礎的檢測技術是主要的檢測方法，然而PCR技術對于引物設計要求高，擴增過程易產生非特異性而導致假陽性結果，檢測較為耗時，通常需要2小時以上，操作復雜，需要在專門實驗室由專業技術人員完成。這些問題限制了其廣泛、便捷應用。表面增強拉曼散射(SERS)因其超靈敏，可實現單個分子水平檢測，樣品用量少，檢測無破壞性，以及可現場即時檢測等優點，被認為是一種極具潛力的分子檢測技術。針對傳統基于PCR的核酸檢測技術的不足，需要開發一種用于腫瘤微小核酸(miRNA)標志物檢測的表面增強拉曼散射(SERS)檢測試劑盒，制備及應用簡單，檢測無需擴增和專業技術人員操作，檢測快速、靈敏度高、特異性好。

發明內容

發明目的：針對當前腫瘤分子檢測對于微小核酸標志物快速靈敏測定的重大需求，以及現有以PCR為基礎的核酸檢測技術在檢測特異性、時效性、便攜操作性等方面的不足，本發明公開了一種用于非疾病診斷目的的腫瘤微小核酸(miRNA)標志物檢測的表面增強拉曼散射(SERS)檢測試劑盒及其制備方法與應用。

該SERS檢測試劑盒包括SERS檢測芯片、第一試劑、第二試劑三部分。其中SERS檢測芯片通過在銀納米棒陣列基片表面修飾發夾型DNA單鏈制備得到，第一試劑為核苷酸序列特殊設計的發夾型DNA單鏈，第二試劑為SERS探針即修飾有核酸探針鏈的金納米球。