[發(fā)明專利]膽固醇和大豆卵磷脂的聯(lián)合作用在雞精液凍后中的應用

在審

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• 申請日: 2022-01-18
• 公開（公告）號: CN114208817A
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發(fā)明（設計）人: 吳彩鳳;何孟纖;戴建軍;張德福;張樹山;孫玲偉;徐皆歡;蔡紹莉
• 申請（專利權）人: 上海市農(nóng)業(yè)科學院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 焦作加貝專利代理事務所(普通合伙) 41182
• 代理人: 馮新志

本發(fā)明提供了一種膽固醇和大豆卵磷脂的聯(lián)合作用在雞精液凍后中的應用，0.25wt%膽固醇和0.5wt%大豆卵磷脂提高了雞精液凍后中的精子活力和精子活率，提高了雞精液凍后中的精子線粒體活性、質膜完整性和頂體完整性，提高了雞精液凍后中的抗氧化性能，即提高了超氧化物歧化酶的含量，降低了丙二醛的含量，膽固醇和大豆卵磷脂聯(lián)合作用時，冷凍稀釋液的成分包括：谷氨酸鈉、果糖、醋酸鈉、檸檬酸鉀、氯化鎂和二甲基乙酰胺；故在雞精液冷凍中，Lake’s稀釋液中聯(lián)合添加0.25wt%膽固醇和0.5wt%大豆卵磷脂時，可降低精子氧化損傷，提高精子凍后品質。

技術領域

本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及一種膽固醇和大豆卵磷脂的聯(lián)合作用在雞精液凍后中的應用。

背景技術

精液超低溫保存是畜禽遺傳資源收集和保護中最有價值的技術之一。精液的冷凍保存就是利用干冰、液氮或者其他制冷的設備作為冷源，將精液進行特殊處理之后，保存在極低溫度下，抑制精子的代謝活動，使精子處于休眠狀態(tài)，在合適的溫度下復蘇精子仍具有受精能力的冷凍保存技術。它被廣泛應用于許多哺乳動物的種質資源保護和商業(yè)化。在家禽中，雖然精液冷凍用于保護其種質資源，但由于凍后精子存活率低、卵子孵化率低，因此實際應用中技術上還需要進一步優(yōu)化^[1]。精子冷凍技術一方面可以最大限度地利用遺傳優(yōu)良的雄性，另一方面對保護家禽種質資源具有重要意義。由于家禽精子的特殊結構，對凍融過程的溫度變化較為敏感^[2]，還需進一步優(yōu)化該技術。

膽固醇是構成細胞膜的重要組成成分，占質膜脂類的20％以上。精子在冷凍過程中，由于溫度的變化，會使精子內(nèi)部液體形成冰晶，造成一系列不可逆損傷，這會導致精子的活力、活率下降。精子細胞膜主要是由脂質和蛋白質組成，脂質主要為磷脂和膽固醇。膽固醇作為膜功能的調節(jié)劑起著多重作用^[3]，對細胞膜的流動性和滲透壓都有著一定的影響。有研究表明，當溫度低時，膽固醇可以干擾細胞的有序性，阻止液晶的形成，降低了膜所轉換的溫度，使膜保持流動的狀態(tài)，從而減少了精子的低溫溫度打擊^[4]。冷凍過程中精子膜上磷脂和膽固醇的外泄是造成精子凍后活力活率降低、存活時間短的重要原因之一^[5]。據(jù)報道，在低溫保存期間，50％的豬精液會丟失約為28％的膽固醇。由于膜膽固醇的丟失會使精子失去活力，從而導致精子失活。膽固醇量對維持細胞的完整性和精子獲能有很大的關系^[6]，E A M Amorim在公牛精液中添加膽固醇可以有效提高精子細胞凍后存活率^[7]。因此，冷凍前，在基礎稀釋液中添加少量的膽固醇能夠有效地減少精子質膜中的質膜的外泄，提高精子凍后活力活率^[8]。

卵黃是精液冷凍保存過程中最常用的非滲透性冷凍保護劑，能夠有效保護精子免受低溫打擊。但卵黃來源于禽類，可能攜帶病原微生物，如沙門氏菌、禽流感等，從而影響精子品質。近年來，用于禽流感、瘋牛病等大規(guī)模畜禽傳染病的影響，精液稀釋液中的動物源成分也可能造成疫情的傳播、交叉感染，甚至可能產(chǎn)生新型疫情^[9]。且卵黃可與精子中的一種蛋白凝固酶發(fā)生凝集反應，不利于精子生存^[11]。正由于卵黃等動物源性稀釋液諸多的不可控因素，近年來非動物源性冷凍保護劑作為替代劑已成為國內(nèi)外相關學者研究的熱點。大豆卵磷脂是從植物源性大豆中提取的一類基礎物質，其核心成分為磷脂酰膽堿。磷脂存在于動植物的細胞中，是構成細胞膜的重要組成部分。大豆卵磷脂能夠有效穩(wěn)定和替代卵黃對精子細胞膜的保護作用，增強精子在冷凍過程中對低溫的耐受性^[12]。在羊精液稀釋液中的卵黃由大豆卵磷脂取代后，可有效地保護精子免受冷凍打擊^[13]。在孫玲偉^[14]的實驗中，添加納米級大豆卵磷脂能有效提高雞精液凍后的質量。P Gogol等將稀釋液中的卵黃替代為大豆卵磷脂在山羊的精液冷凍中也取得了較高的凍后活率P^[15]。但在家禽精液冷凍稀釋液中非動物源性冷凍保護劑研究甚少，因此它對家禽精子功能特性的影響尚需要進行進一步探索。