[發(fā)明專利]一種細胞培養(yǎng)板及其使用方法

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• 申請日: 2022-01-18
• 公開（公告）號: CN114317268A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 肖財根
• 申請（專利權(quán)）人: 肖財根
• 主分類號: C12M3/00
• 分類號: C12M3/00;C12M1/04;C12M1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種細胞培養(yǎng)板及其使用方法，屬于細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明可以通過設(shè)置上蓋將培養(yǎng)板本體進行半封閉，并利用環(huán)形溝槽提高培養(yǎng)板本體內(nèi)的溫度穩(wěn)定性和均衡的濕度環(huán)境，然后利用電磁鐵施加磁場，迫使上蓋上的磁斥封球離開類球形孔與外界相連通，磁斥封球通過上拉線牽引釋氧驅(qū)球變形壓縮并向側(cè)邊擴張，從而迫使換氣分罩分開撥動空氣的流動，然后空氣從類球形孔處進入補充氧氣，同時產(chǎn)生的二氧化碳可以跟隨空氣流動排出，接著依次控制其余的電磁鐵對多個類球形孔進行開放，從而保證培養(yǎng)板本體內(nèi)的細胞培養(yǎng)環(huán)境相對穩(wěn)定，尤其是溫濕度相對均勻，明顯改善甚至是消除細胞培養(yǎng)的邊緣效應(yīng)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細胞培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種細胞培養(yǎng)板及其使用方法。

背景技術(shù)

細胞培養(yǎng)板，是一種生物學(xué)用具，細胞培養(yǎng)中的邊緣效應(yīng)是指在使用多孔板的細胞培養(yǎng)中，在周邊孔中的細胞會集中在孔的外側(cè)，這種現(xiàn)象在實驗中常用的96孔板中十分明顯。邊緣孔的數(shù)量占到總數(shù)的1/3，這就意味著因為此誤差所導(dǎo)致的影響相當(dāng)巨大。

由于大多細胞的生長會受周圍接觸細胞的抑制，所以邊緣效應(yīng)導(dǎo)致邊緣孔內(nèi)細胞平均生長速度要比其他孔來得慢，從而在實驗過程中引入系統(tǒng)誤差。在很多大規(guī)模藥物篩選實驗中，人們甚至棄去周圍孔的實驗結(jié)果，這就意味著每三塊96孔培養(yǎng)板只能被當(dāng)作兩塊板使用。

邊緣效應(yīng)是由于在室溫下的培養(yǎng)板轉(zhuǎn)移到37℃培養(yǎng)箱后，培養(yǎng)板上產(chǎn)生的溫度差影響細胞沉降引起的。我們的另一個實驗證據(jù)是細胞培養(yǎng)板在37℃條件下放置一段時間以后取出，加入細胞而不放入37℃環(huán)境，發(fā)現(xiàn)細胞呈相反的沉降趨勢。這兩點足以證明產(chǎn)生細胞邊緣效應(yīng)的決定性因素就是細胞沉降過程中內(nèi)、外孔之間熱動力學(xué)失衡。

目前克服該現(xiàn)象的方法是在培養(yǎng)板內(nèi)分入細胞后，在室溫下放置1-2個小時，讓細胞在沒有溫度差的情況下沉降，然后再轉(zhuǎn)移到37℃培養(yǎng)箱內(nèi)。該方法至少適合CHO等在室溫下能貼壁的細胞。該方法的缺陷是對于脆弱的細胞外界環(huán)境溫度降低會導(dǎo)致細胞應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生，從而改變細胞的性狀，尤其是原代培養(yǎng)的細胞更加不能忍受如此苛刻的生存條件，因此會發(fā)生細胞生長狀態(tài)不佳、細胞凋亡甚至死亡。

發(fā)明內(nèi)容

1．要解決的技術(shù)問題

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種細胞培養(yǎng)板及其使用方法，可以通過設(shè)置上蓋將培養(yǎng)板本體進行半封閉，并利用環(huán)形溝槽提高培養(yǎng)板本體內(nèi)的溫度穩(wěn)定性和均衡的濕度環(huán)境，然后利用電磁鐵施加磁場，迫使上蓋上的磁斥封球離開類球形孔與外界相連通，磁斥封球通過上拉線牽引釋氧驅(qū)球變形壓縮并向側(cè)邊擴張，從而迫使換氣分罩分開撥動空氣的流動，然后空氣從類球形孔處進入補充氧氣，同時產(chǎn)生的二氧化碳可以跟隨空氣流動排出，接著依次控制其余的電磁鐵對多個類球形孔進行開放，從而保證培養(yǎng)板本體內(nèi)的細胞培養(yǎng)環(huán)境相對穩(wěn)定，尤其是溫濕度相對均勻，明顯改善甚至是消除細胞培養(yǎng)的邊緣效應(yīng)。

2．技術(shù)方案

為解決上述問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案。

一種細胞培養(yǎng)板，包括培養(yǎng)板本體以及與培養(yǎng)板本體相匹配的上蓋，所述培養(yǎng)板本體內(nèi)端形成有低于培養(yǎng)板本體開口處的平面，所述平面上端開設(shè)有多個均勻分布的培養(yǎng)孔，所述培養(yǎng)孔上端固定連接有相匹配的外延圍邊，所述平面外側(cè)開設(shè)有環(huán)形溝槽，且環(huán)形溝槽將多個培養(yǎng)孔包圍，所述上蓋上開設(shè)有多個與培養(yǎng)孔相對應(yīng)的類球形孔，所述類球形孔內(nèi)活動鑲嵌有相匹配的磁斥封球，所述培養(yǎng)板本體底端鑲嵌連接有多個與磁斥封球相對應(yīng)的電磁鐵，所述類球形孔下端固定連接有相連通的走氣管，所述走氣管下端固定連接有釋氧驅(qū)球，所述類球形孔下端還固定連接有換氣分罩，且換氣分罩套設(shè)于走氣管和釋氧驅(qū)球外側(cè)，所述上蓋下端固定連接有多個與磁斥封球相對應(yīng)的外包膜，且外包膜套設(shè)于換氣分罩外側(cè)，所述磁斥封球與釋氧驅(qū)球之間固定連接有多根上拉線。

進一步的，所述培養(yǎng)板本體和上蓋均為透明材質(zhì)，所述環(huán)形溝槽內(nèi)填充有培養(yǎng)基或者無菌水中的一種，技術(shù)人員可以直觀的觀察到細胞培養(yǎng)情況，通過環(huán)形溝槽也可以提高培養(yǎng)板本體內(nèi)的溫度穩(wěn)定性和均衡的濕度環(huán)境，輔助改善邊緣效應(yīng)。