[發明專利]一種青海湖裸鯉肌肉細胞系構建方法

在審

• 申請號: 202210001963.8
• 申請日: 2022-01-04
• 公開（公告）號: CN114317419A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 衛福磊;梁健;尹衛;許丁凡;岳苗;謝保勝;楊建新;俞錄賢;豐朝暉;祁宏芳;田文根;王洪超;周衛國
• 申請（專利權）人: 青海大學;青海湖裸鯉救護中心（青海省魚類原種良種場）
• 主分類號: C12N5/077
• 分類號: C12N5/077;A01N1/02;C12R1/91
• 代理公司: 成都華風專利事務所(普通合伙) 51223
• 代理人: 杜朗宇

1.一種青海湖裸鯉肌肉細胞系構建方法，包括原代培養、傳代培養、細胞凍存與復蘇，其特征在于，所述原代培養的細胞培養液的組分包括：基礎培養基、10～30％的牛血清、200～400IU/mL青霉素、200～400μg/mL鏈霉素；

所述傳代培養的細胞培養液的組分包括：基礎培養基、10～30％牛血清、50～250IU/mL青霉素、50～250μg/mL鏈霉素；

所述細胞凍存的凍存液組分包括：基礎培養基、10～30％牛血清、50～250IU/mL青霉素、50～250μg/mL鏈霉素、5～30％DMSO。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述原代培養的細胞培養液的組分包括：基礎培養基、10～20％牛血清、200～300IU/mL青霉素、200～300μg/mL鏈霉素；

所述傳代培養的細胞培養液的組分包括：基礎培養基、10～20％牛血清、50～100IU/mL青霉素、50～100μg/mL鏈霉素；

所述細胞凍存的凍存液組分包括：基礎培養基、10～20％牛血清、50～100IU/mL青霉素、50～100μg/mL鏈霉素、10～20％DMSO；

進一步地，所述原代培養的細胞培養液的組分包括：基礎培養基、15％牛血清、300IU/mL青霉素、300μg/mL鏈霉素；

所述傳代培養的細胞培養液的組分包括：基礎培養基、15％牛血清、100IU/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素；

所述細胞凍存的凍存液組分包括：基礎培養基、15％牛血清、100IU/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素、10％DMSO。

3.根據權利要求1或2所述的構建方法，其特征在于，所述原代培養、傳代培養中的基礎培養基選自DMEM(high glucose)、DMEM(low glucose)、L-15、RPMI 1640培養基中的一種，優選為DMEM(high glucose)培養基；

所述凍存液中的基礎培養基為DMEM(high glucose)培養基；

所述牛血清選自胎牛血清、小牛血清中的一種，優選胎牛血清；

進一步地，所述DMEM(high glucose)培養基為4500mg/L D-葡萄糖。

4.根據權利要求1～3任一項所述的構建方法，其特征在于，所述原代培養、傳代培養、細胞凍存的培養液組分中均還包括1～5mmol/L谷氨酰胺、1～5mmol/L丙酮酸鈉。

5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，所述原代培養的細胞培養液的組分包括：基礎培養基、10～20％牛血清、200～300IU/mL青霉素、200～300μg/mL鏈霉素、1～5mmol/L谷氨酰胺、1～5mmol/L丙酮酸鈉；

所述傳代培養的細胞培養液的組分包括：基礎培養基、10～20％牛血清、50～100IU/mL青霉素、50～100μg/mL鏈霉素、1～5mmol/L谷氨酰胺、1～5mmol/L丙酮酸鈉；

所述細胞凍存的凍存液組分包括：基礎培養基、10～20％牛血清、50～100IU/mL青霉素、50～100μg/mL鏈霉素、10～20％DMSO、1～5mmol/L谷氨酰胺、1～5mmol/L丙酮酸鈉；

進一步地，所述原代培養的細胞培養液的組分包括：基礎培養基、15％牛血清、300IU/mL青霉素、300μg/mL鏈霉素、2.5mmol/L谷氨酰胺、2.5mmol/L丙酮酸鈉；

所述傳代培養的細胞培養液的組分包括：基礎培養基、15％牛血清、100IU/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素、2.5mmol/L谷氨酰胺、2.5mmol/L丙酮酸鈉；

所述細胞凍存的凍存液組分包括：基礎培養基、15％牛血清、100IU/mL青霉素、100μg/mL鏈霉素、10％DMSO、2.5mmol/L谷氨酰胺、2.5mmol/L丙酮酸鈉。