[發明專利]一種冬蟲夏草菌中國被毛孢的原生態分離法

無效

• 申請號: 201210302363.1
• 申請日: 2012-08-23
• 公開（公告）號: CN102845218A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 馬建彬
• 申請（專利權）人: 大化金玉草生物科技有限責任公司;馬建彬
• 主分類號: A01G1/04
• 分類號: A01G1/04
• 代理公司: 廣東中億律師事務所 44277
• 代理人: 覃向紅

1.一種冬蟲夏草菌中國被毛孢的原生態分離法，包括以下步驟和條件：

a、種源是來自于中國青海玉樹地區的新鮮的正在成熟的冬蟲夏草，采集時要保留以子實體周圍直徑10～12cm、深8～12cm的土壤；培養基來源于冬蟲夏草的寄主蝙蝠蛾幼蟲的活體，選擇白潤、健壯的，4～5齡期的、活的蝙蝠蛾幼蟲，采集時及時用無菌水漂洗并儲放；所述冬蟲夏草和冬蟲夏草的寄主蝙蝠蛾幼蟲的活體在采集后的儲存溫度為0～4℃，儲存時間為0～15天；

b、將種源轉接于培養基上進行培養，培養時參數控制在溫度6～9℃，pH值6～6.5，光照50～100lux，空氣濕度55～60%，氧氣含量20%。

2.根據權利要求1所述的冬蟲夏草菌中國被毛孢的原生態分離法，其特征為還包括以下步驟和條件：

a、所述種源在采集時應及時用滅過菌的牛皮紙袋套住冬蟲夏草子實體部分，將所述種源的子實體正在彈射的子囊孢子進行分離，即當見到牛皮紙上附著有白色、線狀子囊孢子時，用無菌剪刀剪取表面線狀子囊孢子所在的牛皮紙片，保存于滅過菌的PE盒中備用；

b、將蝙蝠蛾幼蟲活體的整條蟲浸泡在75度酒精里3分鐘，再用無菌水換洗3次；將消毒過的蝙蝠蛾幼蟲切去頭部、外皮和黑色的腸道，再打漿，用巴馬天壽泉天然礦泉水微調pH值至6～6.5，加入1.8～2.2％（wt%）的瓊脂，制成試管斜面或平板，凝固作為培養基；

c、培養：用無菌接種環，挑取牛皮紙片上的白色線狀子囊孢子，轉接于所述培養基試管斜面或平板上，并放入培養箱中培養40～45天。

3.根據權利要求1所述的冬蟲夏草菌中國被毛孢的原生態分離法，其特征為還包括以下步驟和條件：

a、將所述種源的蟲體部分，首先用9～11℃無菌水清洗掉其表面的膜皮，然后，用濃度0.1％氯化汞對它們進行表面消毒10～15分鐘，然后，用無菌水清洗5～7次，保存于滅過菌的試管中；

b、將蝙蝠蛾幼蟲活體的整條蟲浸泡在75度酒精里3分鐘，再用無菌水換洗3次；將消毒過的蝙蝠蛾幼蟲切去頭部、外皮和黑色的腸道，再打漿，用巴馬天壽泉天然礦泉水微調pH值至6～6.5，加入1.8～2.2％（wt%）的瓊脂，制成試管斜面或平板，凝固作為培養基；

c、培養：用滅過菌的鑷子從試管中取出冬蟲夏草，用無菌手術刀從蟲體頭部切離子實體，再用另一無菌手術刀將蟲體部分切成1.5～2.0?mm薄片，轉接于培養基試管斜面或平板上，并放入培養箱中培養，設置溫度6～9℃，光照50～100lux，空氣濕度55～60%，氧氣含量20%，培養50～55天。