[發(fā)明專利]基于CRISPR/Cas9構建Ets2基因超級增強子敲除動物模型的方法及其應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202111674779.1 | 申請日： | 2021-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN114958908A | 公開（公告）日： | 2022-08-30 |
| 發(fā)明（設計）人： | 秦利濤;張倩;郭正隆;郝冰濤;王紅丹;張曉梅;王鑫;康冰;張安 | 申請（專利權）人： | 河南省人民醫(yī)院 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/89;C12N15/113;C12N15/12;C12N15/55;A01K67/027 |
| 代理公司： | 北京科家知識產權代理事務所(普通合伙) 11427 | 代理人： | 宮建華 |
| 地址： | 450000 *** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 基于 crispr cas9 構建 ets2 基因 超級 增強 動物 模型 方法 及其 應用 | ||
【權利要求書】：
1.基于CRISPR/Cas9構建Ets2基因超級增強子敲除動物模型的方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)靶向小鼠SEts2序列的gRNA設計：
根據(jù)SEts2序列設計一對相應的gRNA，所述gRNA的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；
所述靶SEts2序列位于小鼠Chr16:95721049-95979933區(qū)域；
2)gRNA制備并顯微注射獲得F0小鼠：
將步驟1)中的一對gRNA進行純化，并與cas9質粒共同注射小鼠胚胎，獲得F0代小鼠；
3)鑒定SEts2基因型，篩選出陽性F0代小鼠；
4)陽性F0代小鼠與野生型小鼠雜交得到F1代小鼠，F(xiàn)1代雜合小鼠自交獲得純合后代，從而構建得到SEts2敲除的動物模型。
2.根據(jù)權利要求1所述敲除動物模型的方法，其特征在于，所述步驟3)用于SEts2基因型鑒定的引物包括公用上游引物和兩條下游引物，所述上游引物序列如SEQ ID NO.3所示，所述下游引物序列如SEQ ID NO.4和EQ ID NO.5所示。
3.一種SEts2敲除的動物模型，其特征在于，由權利要求1或2所述方法構建得到。
4.權利要求3所述動物模型可以在多個器官發(fā)育過程中研究超級增強子對Ets2基因調控的機制。
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