[發明專利]一種樣本釋放劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202111640131.2
• 申請日: 2021-12-29
• 公開（公告）號: CN115197937A
• 公開（公告）日: 2022-10-18
• 發明（設計）人: 李宗洋;戚業民;李云莉;王光宇
• 申請（專利權）人: 北京邁佳致和科技有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 鄒智弘

本發明提供了一種復配的樣本釋放劑及其制備方法和應用，該釋放劑的釋放速度快，避免繁雜的提取流程，通過簡單的釋放，可以在5?15min釋放不同的樣本、同時可以進行滅活，提高樣本檢測效率。而且還具有檢測靈敏度高，對弱陽性樣本有響應；同時對樣本有較好的保存作用，保存時間長；對多種樣本的兼容性好等特點。

技術領域

本發明屬于生物試劑領域，具體涉及一種樣本釋放劑及其制備方法和應用。

背景技術

核酸提取技術是分子生物學研究的基礎，現已廣泛應用于病原微生物檢測、環境微生物檢測、食品安全檢測等領域。傳統的核酸提取方法包括物理方法、化學方法和生物方法等，其中物理方法包括煮沸法、磁珠法、超聲波法等；化學方法包括表面活性劑、堿裂解法等；生物方法主要包括酶法等。目前，提取核酸時使用的釋放劑存在的主要問題在于細胞裂解不完全，造成核酸釋放不徹底，所得核酸(尤其是RNA)不穩定，受溫度、酶等因素易降解；另外由于細胞內蛋白含量較高，且含有大量可能干擾核酸檢測的物質，造成提取試劑與檢測體系經常不能很好匹配，因此還需要采用傳統方法經過多步驟、采用多種不同試劑等繁瑣的技術手段來去除聚合酶鏈式反應(PCR)的抑制劑。

目前使用的核酸提取方法主要包括以下四種：(1)傳統煮沸法：將堿性裂解液直接與含病原液體混合，高溫裂解，離心獲取核酸；(2)濃縮煮沸法：先用多聚糖濃縮沉淀病原，然后加堿性裂解液高溫裂解，離心獲取核酸；(3)離心柱法：采用硅膠膜或玻璃纖維膜吸附、純化、洗脫獲取核酸；(4)磁珠法：采用硅粉或聚乙二烯包被的磁珠吸附、然后進行純化和洗脫獲取核酸。

采用上述第(1)和(2)種方法提取時需要多次換管離心等步聚，樣本處理時間長，得率偏低；離心柱法雖然好于第(1)和(2)種方法，但步聚仍繁多，提取效率低；磁珠法提取步聚簡單，回收率高，易于自動化提取，但產品價格十分昂貴，目前應用并不廣泛。

樣本釋放劑可以通過破壞細胞膜和細胞器膜，釋放細胞中各類待檢物質，如核酸，為核酸提取帶來了便利。但現有的樣本釋放劑存在容易漏檢、檢出靈敏度低、準確性均不高、檢測成本高、速度慢等不足，因此開發新的樣本釋放劑意義重大。

發明內容

為改善上述技術問題，本發明提供了一種樣本釋放劑，以樣本釋放劑的總體積計，包括：濃度為0.01-10％(w/v)的表面活性劑、濃度為0-5M的輔助鹽、濃度為0.01-500mM的pH調節劑、濃度為0.01-20％(w/v)的促進劑、濃度為0.01-5M的穩定劑和濃度為0.01-3％(w/v)的抑菌劑。

根據本發明的實施方案，所述表面活性劑選自莎梵婷、四丁基氟化銨、四丁基溴化銨、四丁基氯化銨、皂角粉、Morwet EFW(烷基萘磺酸鹽)、十二烷基肌氨酸鈉(N-月桂酰肌氨酸鈉)、十二烷基硫酸鈉、十二烷基磺酸鈉、十二烷基醇醚磷酸酯鉀、椰油酰胺丙基甜菜堿、月桂酰胺丙基甜菜堿、十六烷基三甲基溴化銨、吐溫-20、吐溫-40、吐溫-60、吐溫-80、Brij-58、曲拉通X-100中的至少一種；優選為十二烷基肌氨酸鈉、莎梵婷、月桂酰胺丙基甜菜堿中的至少一種。

根據本發明的實施方案，所述樣本釋放劑中表面活性劑的濃度為0.01-10％(w/v)，例如濃度為0.01-8％(w/v)、0.05-5％(w/v)、0.1-2.5％(w/v)；示例性地，濃度為1％(w/v)。

根據本發明的實施方案，所述輔助鹽可以選自鈉鹽或鉀鹽，例如選自氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、硫酸鎂、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、磷酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、檸檬酸鈉、氟化鈉、氟化氫鉀、氟化銫、氯化鈉、氯化鉀和溴化鈉等中的至少一種；優選地，所述輔助鹽選自碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、磷酸鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、檸檬酸鈉、氟化鈉、氯化鈉或溴化鈉；更優選選自氯化鈉、碳酸氫鈉、氯化鉀中的至少一種。

根據本發明的實施方案，所述樣本釋放劑中輔助鹽的濃度為0-5M，例如濃度為30-200mM，2-4M；示例性地，濃度為150mM。