[發明專利]一種制備凝血酶原復合物的方法

在審

• 申請號: 202111636902.0
• 申請日: 2021-12-28
• 公開（公告）號: CN116350752A
• 公開（公告）日: 2023-06-30
• 發明（設計）人: 王強;陳海;楊彩蘭;鄭理;何炫;何海濤
• 申請（專利權）人: 四川遠大蜀陽藥業有限責任公司
• 主分類號: A61K38/36
• 分類號: A61K38/36;A61P7/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種制備凝血酶原復合物的方法，屬于生物制藥血液制品技術領域。具體步驟包括去冷沉淀血漿制備、陰離子交換劑吸附、洗滌、洗脫步驟，其中洗滌步驟的洗滌液中加入凝血酶抑制劑，洗脫步驟的洗脫液中不加入凝血酶抑制劑。本發明公開的凝血酶原復合物制備方法，肝素的添加量可控且添加量低，同時提供了獲得無凝血酶活性、凝血因子活化水平符合《中國藥典》標準的凝血酶原復合物產物的可能性。本發明公開的方法肝素損耗進一步降低，生產成本低，尤其適用于凝血酶原復合物制品的工業級放大生產。

技術領域

本發明涉及生物制藥血液制品技術領域，具體涉及一種從血漿及其衍生物中制備凝血酶原復合物的方法。

背景技術

人凝血酶原復合物(Prothrombin?Complex?Concentrate，PCC)，亦稱PPSB(Prothrombin，Proconvertin，Stuart?Factor，Antihemophilic?Factor?B)，泛稱因子IX濃制劑，是血漿來源的凝血因子提取物。這些凝血因子都在肝臟中合成，都屬于維生素K依賴蛋白(Vitamin?K?dependent，VKD)，它們的許多理化、生物學性質很相近，故用一般方法不易分開。最常用的制劑都含有因子II、IX和X，因子VII的含量因則因制備方法不同差別較大。

PCC主要用于治療凝血因子IX缺乏癥(乙型血友病)，抗凝劑過量，維生素K缺乏癥，肝病導致的需要糾正凝血功能障礙的出血患者，各種原因所致的凝血酶原時間延長而擬作外科手術患者，治療已產生因子VIII抑制物的甲型血友病患者的出血癥狀，逆轉香豆素類抗凝劑誘導的出血等。因為PCC還含有凝血因子II、VII和X，因此PCC更加被推薦用于糾正華法林引起的凝血異常，以及先天性和獲得性凝血因子II、VII、IX、X缺乏癥(單獨或聯合缺乏)。

PCC的臨床應用主要依賴其促凝功能，但其抗凝功能太弱又容易引發血栓風險，用PCC治療可能導致血栓和彌散性血管內凝血(DIC)。因此，一方面，業內對應發展了一種工藝，包括常規的柱層析法或抗凝血因子IX的單克隆抗體親和層析法以制備高純度凝血因子IX，高純度凝血因子IX的治療顯示不發生上述不良反應。另一方面，可以添加一定量的肝素來減少PCC制備過程中微量凝血酶和致血栓活性生成的可能性。再一方面，也可以在PCC制品中加入肝素和/或抗凝血酶(antithrombin，AT)以降低致栓性?！吨袊幍洹泛汀稓W洲藥典》規定PCC中每1IU凝血因子IX的肝素含量應不高于0.5IU，未規定AT的量。

大多數的血液制品廠家傾向于在PCC成品中加入肝素，以防止或減少凝血因子活化的危險，而非在制備工藝中加肝素，主要原因是避免制備工藝中添加的肝素影響其他血液制品產品開發。比如中國專利CN108441490A公開，在PCC分裝前配制工藝環節加入肝素及抗凝血酶III(AT3)，可以大大降低PCC在使用時血栓的發生，提高臨床使用安全性。也有研發人員開發出了在常規的柱層析環節添加肝素的方案，以最大程度地控制VKD蛋白活化以及降低對其他血漿蛋白回收的影響。比如CN106676089B公開，在吸附血漿后的DEAESephadex?A50凝膠洗滌緩沖液和洗脫緩沖液中分別添加200-500IU/mL肝素，實現了控制VKD蛋白活化、降低對其他血漿蛋白回收的影響。但是，該技術改進方案在實際工藝擴大過程中遇到肝素消耗量過大、肝素添加量隨洗滌洗脫液的體積變化而變化，無法準確定量添加肝素等技術問題。同時，PCC制備工藝中引入過量的肝素，制品容易出現肝素超標的情況，而PCC制品肝素量過多，將增加肝素誘導血小板減少癥發生的風險(Bershad?EM，SuarezJI.Prothrombin?Complex?concentrates?for?oral?anticoagulant?therapy-relatedintracranial?hemorrhage：A?review?of?the?literature.Neurocrit?Care.2010，12(3)：403-413)。

發明內容