[發明專利]ESR1基因突變多重檢測引物探針及其試劑盒

在審

• 申請號: 202111617389.0
• 申請日: 2021-12-28
• 公開（公告）號: CN114214413A
• 公開（公告）日: 2022-03-22
• 發明（設計）人: 洪專;潘文健
• 申請（專利權）人: 普瑞斯新（上海）生物醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 常州市江海陽光知識產權代理有限公司 32214
• 代理人: 蔣欣

本發明涉及一種ESR1基因突變多重檢測引物探針及其試劑盒包括上游引物、下游引物、野生型探針、檢測ESR1基因10號外顯子Y537C突變的突變型探針MP?Y537C、檢測ESR1基因10號外顯子Y537N突變的突變型探針MP?Y537N、檢測ESR1基因10號外顯子Y537S突變的突變型探針MP?Y537S、檢測ESR1基因10號外顯子D538G突變的突變型探針MP?D538G。本發明的ESR1基因突變多重檢測引物探針及其試劑盒快速高效，標準品的配制簡單，檢測體系的特異性與靈敏度高，游離DNA的利用率高，準確度高。

技術領域

本發明涉及一種ESR1基因突變檢測產品，屬于生物技術領域。

背景技術

ESR1(Estrogen Receptor1)基因編碼的人類雌激素受體α蛋白(Estrogenreceptor alpha,ESRα)，其與雌激素結合后，激活細胞內一系列周期反應，促使細胞生長增值。ESR1基因的激活突變如乳腺癌的發生發展息息相關。其中，ESR1基因最為常見的突變類型為有Y537S，Y537C，Y537N以及D538G。這些突變使得ESRα的構象改變，使其可在不與雌激素結合的情況，表現為持續性激活狀態。

乳腺癌是最常見的婦科婦科腫瘤之一。超過70％的原發性乳腺癌雌激素受體(ER)呈陽性，許多乳腺癌最初對內分泌治療有反應。盡管治療乳腺癌的新療法的開發正在不斷改善，但對這些藥物的先天和獲得性耐藥性仍然是一個挑戰。腫瘤微環境被認為是賦予癌癥治療先天耐藥性的主要因素，而很大一部分患者在接受他莫昔芬等全身抗雌激素或雌激素剝奪治療如芳香化酶抑制劑(AIs)時會產生耐藥性。許多機制，包括激活細胞存活、細胞應激和細胞信號通路，已經被認為是獲得性耐藥性的驅動因素。最近研究指出了雌激素受體(ESR1)基因的激活突變在驅動耐藥性中起重要作用。已確定的關鍵的激活突變熱點有p.L536，p.Y537和p.D538，這些突變產生不依賴于雌激素配體的內質網轉錄活性，被認為是耐藥突變。

由于腫瘤自身的異質性，存在繼發性耐藥。癌癥生物標志物在疾病類型和疾病進展階段而不同，這使早期階段的癌癥檢測和識別復雜化。癌癥生物標志物在疾病類型和疾病進展階段而不同，這使早期階段的癌癥檢測和識別復雜化。循環腫瘤DNA(ctDNA)作為一種“液體活檢”手段越來越突出，用于檢測和監測系統治療的耐藥性。對激素治療的獲得性耐藥性可能是基于雌激素受體基因(ESR1)的激活突變。使用cfDNA進行腫瘤突變檢測的優點包括i)無創收集，ii)病程中任何時間的可用性，iii)實時檢測和動態監測與腫瘤組織檢測相比，異質性問題可能更少。體外和臨床前數據表明，ESR1突變導致AI完全耐藥，并對ER激動劑和拮抗劑產生部分耐藥。ESR1激活突變的檢測可能與指導臨床醫生進行內分泌和非內分泌治療。cfDNA片段相對較小，峰值大小約為180bp。腫瘤來源的DNA部分在總cfDNA中的百分比是單獨可變的，往往太低，無法檢測。因此，開發一種具有高靈敏度的基于cfDNA的EGFR突變檢測方法具有重要意義。

聚合酶鏈反應(PCR)的發明改變了生命科學的研究和分子診斷?，F在，數字PCR(dPCR)正在改變傳統PCR的領域，并重新定義了對突變檢測的檢測下線。對于許多檢測方法，dPCR的敏感度明顯高于傳統的PCR分析，并且通過單獨計數更多的分子，提高了檢測方法的準確性和精度。數字PCR的敏感性將會提高檢測限制重新定義了我們對疾病發病、進展和復發的理解。數字PCR的一個特別有吸引力的應用是在大量野生型分子中定量檢測少量的突變DNA分子，這與癌癥研究有關，特別是與次要等位基因的檢測有關。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種快速高效，檢測體系的特異性與靈敏度高，游離DNA的利用率高，準確度高的ESR1基因突變多重檢測引物探針，以及采用該引物探針的試劑盒。