[發明專利]一種具有廣譜中和活性的新冠病毒抗體及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202111591859.0
• 申請日: 2021-12-24
• 公開（公告）號: CN113999321B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 楊利敏;范文輝;劉文軍;畢玉海
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K16/10;C07K16/02;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/22;C07K1/16;C12N15/62;C12N15/85;A61K39/42;A61P31/14
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 李洋

本發明公開了一種具有廣譜中和活性的新冠病毒抗體及其制備方法與應用。本發明的新冠病毒抗體的制備方法包括如下步驟：采用免疫原免疫禽類動物，得到所述抗體；所述免疫原包括蛋白質A和蛋白質B，所述蛋白質A的氨基酸序列如序列表中序列3所示；所述蛋白質B的氨基酸序列如序列表中序列6所示。該新冠病毒抗體針對新冠病毒野生毒株和變異毒株均具有良好的交叉中和活性，而且誘導的抗體滴度遠高于已報道的采用滅活疫苗獲得抗體水平。小鼠鼻腔吸入后，可獲得針對高劑量新冠病毒攻毒的保護，肺部未見到明顯病理變化。大耳白兔鼻腔吸入后，可在支氣管和肺臟中檢測到高滴度的中和抗體。該抗體可被開發成鼻用制劑，用于新冠病毒感染的預防和/或治療。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種具有廣譜中和活性的新冠病毒抗體及其制備方法與應用。

背景技術

全球新冠病毒（SARS-CoV-2）疫情依舊嚴峻，不斷出現的突變株造成了多地疫情反復。從早期的Alpha毒株，到如今肆虐近百個國家的Delta毒株以及新出現的Omicron毒株，變異毒株的傳染性逐漸增強，而新冠疫苗的保護效力呈減弱趨勢。

盡管全球已有多個疫苗獲得緊急使用授權，但這些疫苗主要以肌肉注射為主，均無法誘導粘膜免疫應答，病毒依然可以在上呼吸道復制并造成感染，因此即使完全接種疫苗也難以有效預防感染。已有多個研究機構開始探索粘膜免疫疫苗，希望通過疫苗接種誘導局部免疫應答，進而在呼吸道表面產生病毒特異抗體，從而阻斷病毒在呼吸道的侵入和感染。然而，由于新冠病毒屬于RNA病毒，具有較強的變異性，新冠病毒的持續變異導致了不斷會有新的變異毒株出現，疫苗的研發難以跟上病毒變異的腳步。如果能夠使呼吸道表面快速形成一層保護性廣譜中和抗體，將能夠有效解決目前的疫情防控難題。

抗體被證明對于新冠肺炎（COVID-19）具有良好的治療效果，目前已有多個治療性單克隆抗體和康復血清獲得緊急使用授權。然而，由于價格昂貴，這些抗體制劑僅用于住院病人重癥肺炎的治療。卵黃抗體是一種成本低廉，易于制備的抗體產品，已被證明可用于SARS-CoV、登革病毒、埃博拉病毒、流感病毒等多種病原微生物的預防和治療。前期有研究嘗試用滅活疫苗免疫產蛋雞制備卵黃抗體，但由于獲得的抗體中和活性較低，其進入體內后會被體液稀釋，從而難以達到免疫保護所需最低抗體水平。只有獲得高中和活性的抗體產品，才有可能被用于新冠肺炎的預防或治療。

發明內容

本發明的目的是提供一種具有廣譜中和活性的新冠病毒抗體及其制備方法與應用。

為了實現上述目的，本發明首先提供了一種免疫原。

本發明提供的免疫原為免疫原甲或免疫原乙；

所述免疫原甲由蛋白質A和蛋白質B組成；

所述免疫原乙由蛋白質C和蛋白質D組成；

所述蛋白質A的氨基酸序列如序列表中序列3所示；

所述蛋白質B的氨基酸序列如序列表中序列6所示；

所述蛋白質C的氨基酸序列如序列表中序列1所示；

所述蛋白質D的氨基酸序列如序列表中序列4所示。

其中，所述蛋白質C依次包括如下功能元件：人白介素10信號肽（序列1第1-18位）；野生型-RBD（序列1第19-224位）；foldon（Fd）蛋白（序列1第225-251位）；His₆標簽（序列1第255-260位）。在細胞中，通過哺乳動物細胞表達載體表達得到的蛋白質C中的人白介素10信號肽在分泌過程中會被切掉，僅保留成熟的目標蛋白，該成熟的目標蛋白即為蛋白質A，其氨基酸序列如序列表中序列3所示。