[發明專利]一種用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝

在審

• 申請號: 202111589722.1
• 申請日: 2021-12-23
• 公開（公告）號: CN114150036A
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 魏東芝;高蓓;王風清;江敏
• 申請（專利權）人: 華東理工大學
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P17/06;C12N1/20;C12R1/19
• 代理公司: 上海華工專利事務所(普通合伙) 31104
• 代理人: 繆利明;趙孟琴

1.一種用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝，其特征在于，以外消旋6-氟-色滿-2-羧酸甲酯為底物，進行兩批次或多批次反應，相鄰批次反應交替使用表達EstS的重組大腸桿菌或表達EstR的重組大腸桿菌作為催化劑，在有機相和水相的雙相體系中反應；

每批次反應完成后，分離有機相和水相，回收未反應完全底物的有機相用于下一批反應；純化水相，去除溶劑，獲得(S)-6-氟-色滿-2-羧酸或(R)-6-氟-色滿-2-羧酸；

在每個批次后補充水相，用于下一批次反應；在每兩個批次后補充底物6-氟-色滿-2-羧酸甲酯，用于下一批次反應；如此循環，實現6-氟色滿-2-羧酸甲酯的連續分批拆分。

2.如權利要求1所述的用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝，其特征在于，每批次反應完成后，采用過濾方法去除菌體或回收固定化細胞后，其中，imcEstS或imcEstR用生理鹽水洗滌3遍作為下一批次的催化劑。

3.如權利要求1所述的用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝，其特征在于，每批次反應完成后，反應液中加入氫氧化鈉溶液調節pH至11-12后，分離有機相和水相，然后在水相中加入鹽酸溶液調節pH至1-2，用乙酸乙酯萃取3遍，旋蒸蒸發除去溶劑，得到(S)-6-氟-色滿-2-羧酸白色固體或(R)-6-氟-色滿-2-羧酸白色固體，未反應完全底物的有機相用于下一批次反應。

4.如權利要求1所述的用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝，其特征在于，所述的雙相體系，有機相為甲苯，水相為磷酸緩沖液。

5.如權利要求1所述的用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝，其特征在于，表達EstR的重組大腸桿菌的催化劑為表達EstR的重組大腸桿菌的凍干菌體或固定化表達EstR的重組大腸桿菌細胞；表達EstS的重組大腸桿菌的催化劑為表達EstS的重組大腸桿菌的凍干菌體或固定化表達EstS的重組大腸桿菌細胞。

6.如權利要求1所述的用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝，其特征在于，當使用表達EstS的重組大腸桿菌進行拆分時，反應體系的pH控制在7.0-7.1；當使用表達EstR的重組大腸桿菌進行拆分時，反應體系的pH控制在7.4-7.5。

7.如權利要求1所述的用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝，其特征在于，雙水相體系的反應溫度為30℃，反應時間為2～40小時。

8.如權利要求1或4所述的用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝，其特征在于，所述有機相的含量的體積百分比為20％-30％。

9.如權利要求1所述的用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝，其特征在于，所述表達EstS的重組大腸桿菌或表達EstR的重組大腸桿菌的濃度為10g/L；外消旋6-氟-色滿-2-羧酸甲酯的濃度是100-200mM。

10.如權利要求1-9任一項所述的用于制備光學純的6-氟-色滿-2-羧酸的連續雙相分批拆分工藝，其特征在于，分批反應時，先投入表達EstS的重組大腸桿菌進行拆分反應；下一批次反應，再投入表達EstR的重組大腸桿菌進行拆分反應。