[發(fā)明專利]一種區(qū)別C57BL/6亞系小鼠的引物、試劑盒和方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202111569510.7
• 申請日: 2021-12-21
• 公開（公告）號: CN114317767A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設計）人: 張曉晴;王妍
• 申請（專利權(quán)）人: 斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12Q1/6806;C12N15/11
• 代理公司: 北京同輝知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 孫艷敏

本發(fā)明公開了一種區(qū)別C57BL/6亞系小鼠的引物、試劑盒和方法，區(qū)別C57BL/6亞系小鼠的引物包括9個SNP位點的內(nèi)部正向引物、內(nèi)部反向引物、外部正向引物和外部反向引物。區(qū)別C57BL/6亞系小鼠的試劑盒包括9個SNP位點的PCR反應體系。區(qū)別C57BL/6亞系小鼠的方法，包括步驟選擇SNP位點，設計引物序列，制備模板DNA，ARMS?PCR擴增，凝膠電泳，結(jié)果分析。對樣品進行檢測可直接區(qū)分出C57BL/6N亞系、C57BL/6J亞系及C57BL/6By亞系，同時也可鑒定到C57BL/6N亞系中的C57BL/6NJ，區(qū)別C57BL/6亞系小鼠的方法更加精確。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于在生物檢測的領(lǐng)域，具體涉及一種區(qū)別C57BL/6亞系小鼠的引物、試劑盒和方法。

背景技術(shù)

目前，隨著近些年國內(nèi)外對生命科學的重視，實驗動物供應及對實驗動物質(zhì)量的把控也成為了科學研究中關(guān)鍵的一環(huán)。C57BL/6小鼠在科學研究中被廣泛使用，然而，最常見的兩大亞系C57BL/6N與C57BL/6J在諸多方面都存在著差異，而這些差異則會導致實驗數(shù)據(jù)的偏差。除此之外還存在一個C57BL/6By亞系，大約1961年該亞系從C57BL/6N中分離出來。因此在進行動物實驗時，一定要根據(jù)需求選擇合適的亞系。但C57BL/6小鼠在外觀上幾乎一致，這就導致在購買或同時飼養(yǎng)過程中無法快速分辨。

C57BL/6各個亞系之間存在許多特異性的單核苷酸多態(tài)性(SNP)，這對小鼠的遺傳監(jiān)測和亞系鑒定幫助很大。目前，已有許多能將其區(qū)分的SNP位點被報道，同時對于SNP的檢測方法也層出不窮，如TaqMan探針法、SNaPshot法、高分辨率熔解曲線分析(HRM)法、PCR-RFLP法等。然而，這些方法耗時且價格昂貴。公開號CN102586457A的專利申請文件公開了45個SNP，通過多重PCR-LDR反應、瓊脂糖電泳及ABI377測序等方法對近交系小鼠進行分型和鑒定，該方法不僅成本高同時也不能對C57BL/6小鼠的亞型進行區(qū)分。而公開號CN110423826A的專利申請文件公開了12個SNPs位點及1個基因突變位點用于C57BL/6亞系小鼠的遺傳檢測，這些SNPs位點只能區(qū)分出C57BL/6J，并不能將C57BL/6By亞系從C57BL/6N中分離鑒定出來，而且采用的KASP方法在合成熒光引物及儀器使用上都需要投入更大的成本。

有鑒于此，特提出本發(fā)明。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種區(qū)別C57BL/6亞系小鼠的引物、試劑盒和方法，解決了不能準確區(qū)分C57BL/6亞系和投入成本高的問題。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的一種快速區(qū)別C57BL/6亞系小鼠的引物，包括三組SNP位點的引物序列：

第一組，SNP位點：rs244794780，引物序列為

rs244794780-FI：SEQ ID NO.1，

rs244794780-RI：SEQ ID NO.2，

rs244794780-FO：SEQ ID NO.3，

rs244794780-RO：SEQ ID NO.4；

SNP位點：rs228546410，引物序列為

rs228546410-FI：SEQ ID NO.5，

rs228546410-RI：SEQ ID NO.6，

rs228546410-FO：SEQ ID NO.7，

rs228546410-RO：SEQ ID NO.8；

SNP位點：rs226310424，引物序列為

rs226310424-FI：SEQ ID NO.9，