[發明專利]一種雙信號放大電化學發光適配體傳感器的制備方法及其檢測Pb2+

在審

• 申請號: 202111544269.2
• 申請日: 2021-12-16
• 公開（公告）號: CN114354582A
• 公開（公告）日: 2022-04-15
• 發明（設計）人: 李麗波;趙萬林;由天艷;劉曉紅;羅莉君
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種雙信號放大電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

(1)首先將6-氮雜-2-硫代胸腺嘧啶、氫氧化鈉加入純化水A中混合均勻，得到混合液A；然后將氯金酸加入純化水B中混合均勻，得到混合液B；將混合液A加入混合液B中得到混合溶液C，在一定溫度條件下避光反應后，將得到的產物裝入透析袋中進行透析，透析后的產物再經冷凍干燥處理得到粉末，即為AuNCs；

(2)將玻碳電極依次用不同粒徑的三氧化二鋁粉末打磨，打磨后依次在水、乙醇和水中超聲后在室溫下干燥，干燥后得到預處理的玻碳電極；

(3)將步驟(1)制備得到的粉末狀AuNCs溶于純化水中，得到AuNCs溶液；然后將AuNCs溶液修飾到步驟(2)預處理的玻碳電極表面，并在室溫下干燥，干燥后的產品標記為AuNCs/GCE；

(4)取巰基功能化的互補DNA，記為cDNA；將cDNA修飾在步驟(3)制備的電極AuNCs/GCE表面，在一定溫度下孵育，孵育后的產品標記為cDNA/AuNCs/GCE；

(5)在室溫條件下，取6-巰基己醇溶液修飾在步驟(4)制備的自組裝電極cDNA/AuNCs/GCE表面，室溫條件下孵育后得到MCH/cDNA/AuNCs/GCE；

(6)取Pb²⁺適配體，記為Apt；在一定溫度下將Apt修飾在步驟(5)制備的電極MCH/cDNA/AuNCs/GCE表面，通過與cDNA互補固定在傳感界面，在一定溫度條件下反應后的產品標記為Apt/MCH/cDNA/AuNCs/GCE；

(7)將羅丹明B溶液修飾在步驟(6)制備的電極Apt/MCH/cDNA/AuNCs/GCE表面，并在室溫下孵育一段時間，形成自組裝傳感器，產品標記為RhB/Apt/MCH/cDNA/AuNCs/GCE。

2.根據權利要求1所述的雙信號放大電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(1)中所述混合溶液C中氯金酸、6-氮雜-2-硫代胸腺嘧啶、氫氧化鈉、純化水A和純化水B用量比例為0.15g：0.17g：0.12g：15mL：15mL；所述一定溫度條件為25℃，避光反應的時間為1h；所述透析的時間為24h。

3.根據權利要求1所述的雙信號放大電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述玻碳電極的直徑d＝3mm；所用的三氧化二鋁粉末的粒徑依次為0.3μm和0.05μm。

4.根據權利要求1所述的雙信號放大電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(3)中，AuNCs溶液的濃度為1mg/mL，用量為8μL。

5.根據權利要求1所述的雙信號放大電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(4)中，所述cDNA的濃度為2μM，用量為6μL；所述孵育時間為12h，孵育溫度為4℃。

6.根據權利要求1所述的雙信號放大電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(5)中，所述6-巰基己醇溶液的濃度為2μM，修飾用量為6μL；所述孵育的時間為40min。

7.根據權利要求1所述的雙信號放大電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(6)中，所述Apt的濃度為2μM，修飾用量為6μL；所述孵育的時間為40min，一定溫度為37℃。

8.根據權利要求1所述的雙信號放大電化學發光適配體傳感器的制備方法，其特征在于，步驟(7)中，所述羅丹明B溶液的濃度為2mM，用量為6μL；所述孵育一段時間為40min。