[發明專利]一種利用多孔聚合物分離材料從魚籽多肽中分離純化具有改善記憶功能的多肽的方法

在審

• 申請號: 202111541323.8
• 申請日: 2021-12-16
• 公開（公告）號: CN114317652A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 劉寶乾;孫祥斌;邸多隆
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘭州化學物理研究所
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;C07K1/04;C07K1/16
• 代理公司: 北京識然知識產權代理事務所(普通合伙) 11975
• 代理人: 曾慶國

本發明提供一種利用多孔聚合物分離材料從魚籽多肽中分離純化具有改善記憶功能的多肽的方法，是將魚籽粉碎勻漿，后利用胰蛋白酶和和膠原蛋白酶進行酶解，得到酶解液，離心，取上清液凍干得魚籽多肽；將魚籽多肽配制成適當濃度的魚籽多肽溶液；將多孔聚合物材料首先利用濕法裝柱，去離子水洗至無醇味，將配制好的魚籽多肽溶液上樣，控制一定流速，收集流出液；最后利用不同濃度的乙醇洗脫分離柱，合并乙醇洗脫部分，分別將收集的流出液及乙醇部分烘干得具有改善記憶功能的魚籽多肽。本發明的方法得到的具有改善記憶功能的魚籽多肽含量更高，更好的改善記憶的效果，并且操作簡單、易規模化制備。

技術領域

本發明屬于天然產物分離純化技術領域，具體涉及一種利用多孔聚合物分離材料從魚籽多肽中分離純化具有改善記憶功能的多肽的方法。

背景技術

多孔有機聚合物材料是一種內部具有交聯網狀結構的高分子聚合物材料，其具有比表面積、孔徑以及粒徑可調和表面易修飾等優點，并且具有操作簡單等優點，被廣泛地應用于天然小分子以及生物活性分子的分離純化。

魚籽是魚類在加工過程中一種重要的副產物，其富含蛋白質、多不飽和脂肪酸、鈣、鐵、維生素、膽固醇等營養物質。魚籽多肽是魚籽蛋白經蛋白酶水解后得到的多肽混合物，是一種生物活性肽，研究表明，魚籽多肽具有降血壓、抗氧化、抗菌、改善記憶以及增強免疫等生物活性。

目前，海洋生物活性肽的分離純化主要是利用膜過濾法，如申請號為CN202110410087.X的中國發明專利提供了一種具有抗氧化和增強免疫功能的鱈魚皮膠原蛋白肽及其制備方法，是將鱈魚皮經過胰蛋白酶和中性蛋白酶酶解，再利用胰蛋白酶進行酶解，酶解液經過膜過濾，再利用SephadexG-15凝膠柱及RP-HPLC反相高效液相色譜進行分離得到具有抗氧化和增強免疫功能的鱈魚皮膠原蛋白肽。申請號為CN202010239844.7的中國發明專利提供了一種從魚籽中制備的改善記憶功能的多肽，是將魚籽進行勻漿，再加入胰蛋白酶和膠原蛋白酶進行酶解，離心去上清液后再進行膜過濾，得到具有改善記憶功能的魚籽多肽。但是該方法得到的具有改善記憶功能的多肽含量低、導致使用的時候需要量大、作用效果不佳。因此，分離純化具有高含量改善記憶功能的多肽是急需解決的問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用多孔聚合物分離材料從魚籽多肽中分離純化具有改善記憶功能的多肽的方法，是以魚籽為原料，多孔聚合物為分離材料，得到具有改善記憶功能的多肽。

本發明所提供的方法，包括如下的步驟：

1)魚籽多肽的制備：將魚籽粉碎勻漿，后利用胰蛋白酶和和膠原蛋白酶進行酶解，得到酶解液，離心，取上清液凍干得魚籽多肽；

所述魚籽為海洋魚類的魚籽，如黃花魚、馬鮫魚、鮟鱇魚或希鯪魚等；

2)魚籽多肽上樣液制備：取魚籽多肽配制成適當濃度的魚籽多肽溶液；

所述配制魚籽多肽的溶劑為去離子水或者10％-90％的乙醇水溶液，魚籽多肽的濃度為50-500mg·mL^-1；

3)多孔聚合物分離材料分離純化：

將多孔聚合物材料首先利用濕法裝柱，去離子水洗至無醇味，將配制好的魚籽多肽溶液上樣，控制一定流速，收集流出液；最后利用不同濃度的乙醇洗脫分離柱，合并乙醇洗脫部分，分別將收集的流出液及乙醇部分烘干得具有改善記憶功能的魚籽多肽；

所述多孔聚合物材料為多孔有機聚合物材料，如聚丙烯酸、聚丙烯酰胺、聚丙烯酸酯類、聚苯乙烯類、天然高分子類等，并且多孔聚合物材料粒徑為5-100μm，孔徑為2-100nm；

所述上樣流速為0.1-5BV·h^-1；不同濃度的乙醇為10％-95％。

本發明的方法得到的具有改善記憶功能的魚籽多肽含量更高，更好的改善記憶的效果，并且操作簡單、易規模化制備。