[發明專利]基于UPLC-QTOF-MS技術結合UNIFI快速篩查中草藥中有毒生物堿的方法

在審

• 申請號: 202111528411.4
• 申請日: 2021-12-15
• 公開（公告）號: CN114200059A
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 何聿;李慧晨;余艷檳
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 林文弘;蔡學俊

本發明鑒于有毒生物堿結構復雜、在生物樣品中含量低、毒性大、中毒無特異性臨床表現等特性，開發了一種基于UPLC?QTOF?MS技術結合UNIFI軟件對中草藥中的有毒生物堿進行高能量、高通量、高效率的準確篩查方法。本發明采用甲醇提取中草藥樣品，有機濾膜過濾，UPLC?QTOF?MS檢測，采用MSE檢測模式對待篩查樣品進行數據采集，借助UNIFI軟件中的天然產物信息庫，對原始數據進行質荷比、分子離子峰、碎片離子等信息的匹配與篩查。與傳統分析檢測方法相比，本方法操作簡單，分析快速，定性結果可靠，為中草藥中有毒生物堿的快速篩選提供了一種良好的分析檢測手段，在中草藥臨床質量控制應用領域上具有重要意義。

技術領域

本發明涉及檢測技術領域，尤其涉及一種基于UPLC-QTOF-MS技術結合UNIFI快速篩查中草藥中有毒生物堿的方法。

背景技術

中草藥是指在中醫理論指導下，用于預防、治療、診斷疾病并具有康復與保健作用的物質，也是中醫區別于其他醫學的重要標志。中草藥主要來源于天然藥及其加工品，包括植物藥、動物藥、礦物藥及部分化學、生物制品類藥物。由于中草藥以植物藥居多，故有“諸藥以草為本”的說法。當今不少的人認為中草藥大多數源出于天然的動植物和純中草藥制劑，比化學藥品的藥性平和而安全，不會發生藥物毒副作用。然而，正如古人云“是藥三分毒”，如果任意濫用，亂役藥石，同樣亦會發生毒副作用。中草藥毒性是由于藥物所含有毒性成分引起的毒性反應，此毒性成分大部分即為有毒生物堿。

生物堿是存在于自然界中一類含氮的堿性有機化合物，有似堿的性質，所以過去也被稱為贗堿。其中一部分生物堿是有毒性的，容易引起中毒。這部分生物堿結構復雜、在生物樣品中含量低、中毒劑量小且毒性大、中毒無特異性臨床表現，這無疑是加大了篩查分析有毒生物堿的難度，因此建立一種簡便且快速篩查多種有毒生物堿的方法對于臨床上中草藥的應用具有重要意義。

綜合國內外的文獻報道，有毒生物堿的分析檢測方法有液相色譜法、液相色譜串聯質譜法、氣相色譜串聯質譜法、薄層色譜法、分子印跡技術、高效毛細管電泳法等。但大多數方法步驟較為復雜、耗時長、檢測對象受限，并且準確度低。

綜上所述，本發明人考慮開發一種基于UPLC-QTOF-MS技術結合UNIFI對常見中草藥中的有毒生物堿進行高能量、高通量、高效率的準確篩查方法，從而大大提高中草藥中有毒生物堿的檢測效率和準確度。

發明內容

本發明解決的技術問題在于提供一種基于UPLC-QTOF-MS技術結合UNIFI快速篩查中草藥中的有毒生物堿的方法，該方法具有快速、靈敏和準確的優勢。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

本發明提供了一種基于UPLC-QTOF-MS技術結合UNIFI快速篩查中草藥中有毒生物堿的方法，所述方法包括以下步驟：

步驟a）將干燥中草藥經粉碎磨成粉末狀，過篩；將中草藥粉末與溶劑混合，室溫下超聲萃取，然后進行離心，上清液經有機濾膜過濾，得到樣品，存于樣品瓶中準備進樣；

步驟b）利用超高效液相色譜串聯質譜儀對步驟a））制備好的樣品進行分離檢測，得到生物堿成分物質峰，用UNIFI軟件對所述物質峰進行定性分析。

進一步的，步驟a）中，所述過篩的目數為60目。

進一步的，步驟a）中，所述溶劑為甲醇，所述中草藥粉末與溶劑的比例為1:100 m/v。

進一步的，步驟a）中，所述超聲萃取時間為30 min，超聲功率為200 W，超聲頻率為40 kHz。

進一步的，步驟a）中，所述離心時間為10 min，離心轉速為10000 rpm。

進一步的，步驟a）中，所述上清液先經孔徑0.45 μm有機濾膜過濾，再經孔徑0.22μm有機濾膜進行過濾。