[發明專利]質譜流式技術用評估NK細胞培養純度的檢測試劑盒及應用

在審

• 申請號: 202111509909.6
• 申請日: 2021-12-10
• 公開（公告）號: CN114200136A
• 公開（公告）日: 2022-03-18
• 發明（設計）人: 孫兵;張俊
• 申請（專利權）人: 南京傲因生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/577;G01N15/14
• 代理公司: 北京盛凡佳華專利代理事務所(普通合伙) 11947
• 代理人: 王艷

本發明公開的屬于質譜流式細胞技術領域，具體為質譜流式技術用評估NK細胞培養純度的檢測試劑盒及應用，本發明公開可檢測人體NK細胞免疫狀態的試劑盒，所述試劑盒可用于監測人體免疫狀態的變化以及評估其NK細胞培養純度，基于特定或統一的培養方法的基礎上，評估樣本中NK細胞培養純度的差異，從而減少NK細胞過度活化，對于評估NK細胞培養純度較低的樣本，控制增加添加物種類或者培養基成份，特異性純化和活化NK細胞，從而減少NK細胞高純度培養與NK細胞低純度培養的樣本之間的差異，利用37種抗體，可以在質譜流式細胞儀平臺通過靜脈采集外周血即可快速、準確地對外周血中免疫細胞進行深度分析以及評估其NK細胞培養純度。

技術領域

本發明涉及質譜流式細胞技術領域，具體為質譜流式技術用評估NK細胞培養純度的檢測試劑盒及應用。

背景技術

質譜流式細胞技術是利用質譜原理對單細胞進行多參數檢測的流式技術，它繼承了傳統流式細胞儀的高速分析的特點，又具有質譜檢測的高分辨能力，是流式細胞技術一個新的發展方向。

質譜流式細胞技術可以實現對細胞群體進行精準的免疫分型，對細胞內信號傳導網絡進行全面的分析，分析細胞亞群之間的功能聯系，以及對于大量樣品的高通量多參數檢測，現有的質譜流式細胞技術大多數都是針對NK細胞培養過程中的培養基成份，或體外加入添加物，或優化分離方法，而忽視樣本供體之間的差異，不管是培養基成份或添加物的引入都將過度活化NK細胞，這將造成NK細胞下游研究的異質性。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施方式的一些方面以及簡要介紹一些較佳實施方式，在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略不能用于限制本發明的范圍。

鑒于現有NK細胞培養中存在的問題，提出了本發明。

為解決上述技術問題，根據本發明的一個方面，本發明提供了如下技術方案：質譜流式技術用評估NK細胞培養純度的檢測試劑盒，本發明公開可檢測人體NK細胞免疫狀態的試劑盒，所述試劑盒可用于監測人體免疫狀態的變化以及評估其NK細胞培養純度，所述試劑盒包含被標記的37種抗體；

所述37種抗體為單克隆抗體CD45、CD196/CCR6、CD123/IL-3R、CD11c、CD16、CD45RO、CD27、CD183/CXCR3、CD185/CXCR5、CD28、TCRgd、CD294/CRTH2、CD197/CCR7、CD14、CD3、CD20、HLA-DR、CD127/IL-7Ra、CD69、CD137、CD62L、Ki67、NKG2A、NKG2D、NKp30、CD19、CD4、CD8、CD45RA、CD161、CD194/CCR4、CD25/IL-2R、CD38、CD56/NCAM、CD66b、CD11b和NKp44。

一種權利如上所述質譜流式技術用評估NK細胞培養純度的檢測試劑盒的應用，包括以下步驟；

S1.血液收集；

S2.FcR-封閉；

S3.染色，染色共分為兩個部分，第一部分進行膜蛋白染色，第二部分進行胞漿蛋白染色；

S4.上機；

S5.數據分析和解讀。

作為本發明所述的質譜流式技術用評估NK細胞培養純度的檢測試劑盒的應用的一種優選方案，其中：包括以下步驟；

1)收集5ml的血液于抗凝管中，以防止凝血和血小板活化，在一支空的15ml離心管中，加入5ml血液和等體積D-Hanks液，混合搖勻，另取一支空的50ml離心管，向其中加入10mlFicoll，再用滴管吸取稀釋血液，沿管壁緩慢滴加于Ficoll上，形成分層，室溫，剎車速度設為1，400gx20min進行密度梯度離心；