[發(fā)明專利]一種類蛇毒三肽的合成方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202111504220.4
• 申請(qǐng)日: 2021-12-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113896763B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王輝平;劉慧敏;傅小明;應(yīng)佳偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江湃肽生物有限公司深圳分公司
• 主分類號(hào): C07K5/083
• 分類號(hào): C07K5/083;C07K1/04;C07K1/06;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/14;A61K8/64;A61Q19/08
• 代理公司: 北京國(guó)翰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11696
• 代理人: 李宇翔

本發(fā)明提供了一種類蛇毒三肽的合成方法，屬于多肽制備方法技術(shù)領(lǐng)域，具體為：以Fmoc?Dab(Boc)?OH、芐胺、Boc?β?Ala?OH和H?Pro?OMe·HCl為原料合成類蛇毒三肽粗品，然后利用高效液相色譜、陰離子交換色譜相結(jié)合的方法對(duì)類蛇毒三肽粗品進(jìn)行純化得到高純類蛇毒三肽，合成工藝路線短，分離純化效果高，所得高純類蛇毒三肽純度，收率高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于多肽制備方法技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種類蛇毒三肽的合成方法。

背景技術(shù)

類蛇毒三肽(H-β-Ala-Pro-DAB-NH-Bzl)是一種模擬蛇毒毒素活性的小分子多肽，研究發(fā)現(xiàn)，類蛇毒三肽可通過(guò)松弛面部肌肉、減少肌肉收縮而達(dá)到平滑和祛皺的目的。目前歐美、韓國(guó)、泰國(guó)等國(guó)已經(jīng)研發(fā)出含有類蛇毒三肽的化妝品，類蛇毒三肽作為化妝品新型的美容成分也越來(lái)越熱門。

目前，常規(guī)合成類蛇毒三肽的方法大多為液相合成和固相合成，但是液相合成的方法步驟較多，比較繁瑣，全部采用液相合成方法得到的類蛇毒三肽粗品的純度不高，總產(chǎn)率也不高，后續(xù)純化收率低；采用固相合成，純化難度較大，收率也極低，采用固相合成或液相合成都不可避免各方法的局限性。因此開(kāi)發(fā)工藝簡(jiǎn)便、成本較低、純度高的類蛇毒三肽合成方法，對(duì)廣泛使用于化妝品的類蛇毒三肽有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，提供一種方法簡(jiǎn)單、收率高、產(chǎn)品純度高的類蛇毒三肽的合成方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：

一種類蛇毒三肽的合成方法，包括下述步驟：

S1、合成H-Dab(Boc)-NHBzl：

在四氫呋喃中，F(xiàn)moc-Dab(Boc)-OH(Nα-芴甲氧羰基-Nγ-叔丁氧羰基-L-2,4-二氨基丁酸)、芐胺、NMM(N-甲基嗎啡啉)、EDCI(1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺)反應(yīng)得到Fmoc-Dab(Boc)-NHBzl，然后用包含哌啶的四氫呋喃溶液脫除Fmoc保護(hù)基，得到H-Dab(Boc)-NHBzl；

S2、合成Boc-β-Ala-Pro-OH：

在四氫呋喃中，Boc-β-Ala-OH(N-叔丁氧羰基-β-丙氨酸)、H-Pro-OMe·HCl(L-脯氨酸甲酯鹽酸鹽)、NMM、HOBT(1-羥基苯并三唑)、EDCI反應(yīng)得到Boc-β-Ala-Pro-OMe，然后用NaOH溶液水解得到Boc-β-Ala-Pro-OH；

S3、合成Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl：

在四氫呋喃中，Boc-β-Ala-Pro-OH、H-Dab(Boc)-NHBzl、HOBT、EDCI反應(yīng)得到Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl；

S4、合成類蛇毒三肽：

將Boc-β-Ala-Pro-Dab(Boc)-NH-Bzl用三氟乙酸水溶液脫除Boc保護(hù)基，得到類蛇毒三肽粗品；

S5、類蛇毒三肽粗品純化：

類蛇毒三肽粗品經(jīng)粗品處理、高效液相色譜、陰離子交換色譜，得到高純類蛇毒三肽；其中，

所述類蛇毒三肽粗品純化過(guò)程中，陰離子交換色譜所用填料為改性聚甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯-三聚氰酸三烯丙酯(PGMA-TCA)色譜填料。